人體腦膜組織提取物【Brain: Normal Human Brain Meninges  Derivatives】
顱骨與腦間有三層膜。由外向內(nèi)為硬腦膜、蛛網(wǎng)膜和軟腦膜；三層膜合稱腦膜。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體腦膜組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人體腦膜組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

培養(yǎng)步驟：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

Myristicin錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體anti- MED8 antibody層粘連蛋白β1(LAMβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

CARNITINE ACETYLTRANSFERASE酸化有絲分裂激酶B/C抗體anti- MEF2A antibody瘦素受體(LEPR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Cinnamyl acetate酸化腺泡Acinus蛋白抗體anti- MEF2BNB antibody瘦素受體(LEPR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

CinnamamideAPS抗體anti- MEF2C antibody瘦素(LEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Potassium L-lactate酸化A-Raf抗體anti- MEF2C antibody瘦素(LEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

L-LACTIC ACID LITHIUM SALT脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體anti- MEF2C antibody白血病抑制因子(LIF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Nisin酸化失調(diào)癥蛋白1抗體anti- MEF2C antibody抗SSA/Ro抗體(Anti-Ro)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Lactobionic acid酸化腺苷單酸活化蛋白激酶β1抗體anti- MEF2C antibody抗單鏈DNA抗體(Anti-ssDNA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

人體腦膜組織提取物Homo sapiens, human雞支原體抗體Human FZD1(Frizzled-1) ELISA Kit棘皮動(dòng)物微管關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白2(EML2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..髓鞘相關(guān)糖蛋白-a抗體Human FZD3(Frizzled-3) ELISA Kit胎盤特異性蛋白9(PLAC9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Phascolomyces articulosus Boedijnmyocardin相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體Human C1QTNF3(Complement C1q tumor necrosis factor-related protein 3) ELISA Kit短腭肺鼻腔上皮癌關(guān)聯(lián)蛋白2(SPLUNC2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Rhizoctonia solani Kuhn, anamorph致癌基因抗體Human SRX1(Sulfiredoxin-1) ELISA Kit短腭肺鼻腔上皮癌關(guān)聯(lián)蛋白3(SPLUNC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Trichophyton verrucosum Bodin, anamorph絲裂原活化蛋白激酶激酶8抗體Human BCL6B(B-cell CLL/lymphoma 6 member B protein) ELISA Kit抑制素βC(INHβC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Mus musculus, mouse embryo酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶8抗體Human UBE2I(SUMO-conjugating enzyme UBC9) ELISA Kit銅伴侶超物歧化酶(SOD4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Schizopora radula (Persoon : Fries) Hallenb ..金屬應(yīng)答元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子-1抗體Human EPHA3(Ephrin type-A receptor 3) ELISA Kit胱天蛋白酶3(CASP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces diastaticus Andrews et Gillil ..MYSM1抗體Human STAT2(Signal transducer and activator of transcription 2) ELISA Kit補(bǔ)體受體2(CR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)