實驗原理：
是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法：
1、   血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、   血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、   細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
4、   組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、   保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

標本要求：
1. 血清：：溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標本因素；
②試劑因素；
③操作因素。
下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。
1．樣品稀釋 酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準確，檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。
2．試劑盒平衡 試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。 
3．樣品和試劑的混勻 稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。
下列是公司是正在的產(chǎn)品：

bFGF/FGF2堿性成纖維細胞生長因子抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L

BFAR/RNF47環(huán)指蛋白47抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(AlkalinePhosphatase)

BEX4腦表達X連鎖蛋白4抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(Biotin)

Beta-lactoglobulinβ-乳球蛋白抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(FITC)

Beta-lactoglobulinβ-乳球蛋白抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(HRP)

Beta-lactoglobulinβ-乳球蛋白抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&Lpreadsorbed

Beta-HCG/HCGbeta人β亞基人絨毛膜*(βHCG)抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(AlkalinePhosphatase)preadsorbed

Beta-caseinβ-酪蛋白抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(Biotin)preadsorbed

Beta-arrestin1β-抑制蛋白1抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(Cy3®)preadsorbed

beta-Amyloid(35-42)β淀粉樣肽/Aβ42抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(Cy5®)preadsorbed

beta-Amyloid(31-35)β淀粉樣肽（31-35）抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(Cy5.5®)preadsorbed

beta-Amyloid(25-35)β淀粉樣肽（25-35）抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(FITC)preadsorbed

beta-Amyloid(1-40)β淀粉樣肽（1-40）抗體DonkeyAnti-GoatIgGH&L(HRP)preadsorbed

beta-Amyloid(1-28)β淀粉樣肽（1-28）抗體DonkeyAnti-SheepIgGH&L

beta-Amyloid(1-16)(human)β淀粉樣肽（1-16）抗體（人）DonkeyAnti-SheepIgGH&L(AlkalinePhosphatase)
CLA檢測試劑盒F1operonpositiveregulatoryprotein肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（C端）RecombinantHumanPAI1protein

Ezrin埃茲蛋白抗體NativeratPlasminogenprotein

EZH1/Histone-lysineN-methyltransferaseEZH1組蛋白賴氨N-基EZH1抗體Anti-RibonucleaseH2,subunitA/RNASEH2Aantibody

EXTL外生性骨疣樣蛋白2抗體NativeRatFibrinogenprotein(FITC)

Exportin5核輸出蛋白5抗體NativeMousePlasminprotein

Exportin1/CRM1染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1/染色體區(qū)域穩(wěn)定必需蛋白抗體Anti-Nephrinantibody

EXPB-2植物延展素-βAnti-Nephrinantibody

Exendin4GLP1類似蛋白Exendin4抗體Anti-Vavproteinsantibody

EVC2膜蛋白EVC2抗體Anti-GATA1antibody

EV71polyproteinVP4腸道病毒71型/手足口病病毒抗體Anti-Cdc25Aantibody

EV71polyprotein3D腸道病毒71型/手足口病病毒抗體Anti-GIMAP7antibody

EURL/C21orf9121號染色體開放閱讀框91抗體Anti-MEG1antibody

Eukaryoticaspartylprotease天冬氨蛋白酶家族蛋白抗體Anti-deltaSarcoglycanantibody

ETV7轉(zhuǎn)錄因子ETV7抗體Anti-FER1L5antibody

ETS2癌基因ETS2抗體Anti-G3BP2antibody

測定步驟：

1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結(jié)果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。