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染色體
轉(zhuǎn)化過程包括有轉(zhuǎn)化能力的染色體DNA 段的吸附、吸收和整合3個階段。外源DNA首先吸附在細菌細胞表面的一些接受位點上。肺炎雙球菌和枯草桿菌等細胞的接受位點沒有專一性,它們能吸附同種的DNA,也能吸附大腸桿菌的DNA。流感嗜血桿菌的接受位點則只能吸附近緣細菌的DNA。DNA在和細菌剛接觸時可以被洗去,在穩(wěn)定吸附以后便不能洗去,但還能被核酸酶水解。DNA被細胞吸收以后便不能被外源的核酸酶水解。能吸附的DNA主要是雙鏈狀態(tài)的,在通過細胞膜進入細胞的吸收過程中DNA分子轉(zhuǎn)變?yōu)閱捂?,并以這種形式整合到細菌染色體上。整合過程又可以分5個步驟。
外源基因整合后,通過基因表達使受體細菌的表型發(fā)生相應的變化。轉(zhuǎn)化模式至少對于肺炎雙球菌和枯草桿菌來講是正確的。
質(zhì)粒
質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化和染色體DNA的轉(zhuǎn)化有顯著的不同。在一般情況下前者的轉(zhuǎn)化效率遠遠低于后者。但如果先用一定濃度的鈣離子處理大腸桿菌細胞,再用質(zhì)粒DNA和染色體DNA對它做轉(zhuǎn)化實驗則情況恰好相反。此外,質(zhì)粒DNA很容易進入去掉了細胞壁的細菌的原生質(zhì)體,說明對它的吸收并不通過專門的接受位點;質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化過程沒有整合這一環(huán)節(jié)。
影響因素
許多因素可以影響轉(zhuǎn)化效率。受體細菌和供體細菌的親緣關(guān)系愈遠則轉(zhuǎn)化效率愈低,這主要是受吸附位點專一性和染色體的同源程度的影響。DNA分子的聯(lián)會是供體DNA整合到受體DNA上的先決條件,聯(lián)會一般只發(fā)生在同源染色體之間,而親緣關(guān)系愈遠則同源性愈低,所以轉(zhuǎn)化效率也愈低。但細菌間染色體的某些部位如核糖體基因部位在進化過程中很少發(fā)生變化,而有些性狀如*抗性和*抗性等都是由于與核糖體有關(guān)的基因發(fā)生突變而使核糖體蛋白結(jié)構(gòu)改變的結(jié)果,所以如果所轉(zhuǎn)化的是*或*抗性基因或者和它們緊密連鎖的其他基因,則轉(zhuǎn)化效率便較少受細菌的親緣關(guān)系的影響。
轉(zhuǎn)化效率
同一種細菌也可以由于基因型的改變而改變轉(zhuǎn)化效率。細菌的限制性核酸內(nèi)切酶能夠分解外來的DNA,所以如果用限制酶失活的突變型菌株作為轉(zhuǎn)化受體時可以提高轉(zhuǎn)化效率。通過篩選也可以得到轉(zhuǎn)化效率顯著下降的突變型,包括吸附能力、吸收能力和整合能力下降的突變型。某些轉(zhuǎn)化效率降低的突變型對于紫外線格外敏感,這一性質(zhì)也是許多喪失了DNA損傷修復能力和喪失重組功能的突變型的特性,可見轉(zhuǎn)化過程中的DNA的整合和DNA損傷修復以及基因重組都涉及某些相同的酶。
基因型*相同的細菌可以由于生理狀態(tài)的改變而改變轉(zhuǎn)化效率。能夠吸收外源DNA的生理狀態(tài)稱為感受態(tài)。許多細菌的感受態(tài)都在對數(shù)生的后期迅速出現(xiàn),經(jīng)過一段時間以后便消失。感受態(tài)的細菌和非感受態(tài)的細菌相比,轉(zhuǎn)化效率可以高出萬倍。
種族特異
從處于感受態(tài)的肺炎雙球菌和鏈球菌中曾分離出感受態(tài)因子。感受態(tài)因子是蛋白質(zhì),它能使非感受態(tài)細菌轉(zhuǎn)變?yōu)楦惺軕B(tài),并有一定的種族特異性。
某些外界因素可以影響轉(zhuǎn)化效率,例如一定濃度的鈣離子能夠提高大腸桿菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌等的轉(zhuǎn)化效率。又例如流感嗜血桿菌吸收雙鏈DNA分子的最適pH是6.8, pH下降到5.5以下便不能吸收。溫度對于轉(zhuǎn)化也有影響,在肺炎雙球菌和嗜血流感桿菌中外源DNA的整合在一定范圍內(nèi)都隨著溫度的上升而提高。
細菌的轉(zhuǎn)化多數(shù)是在人為條件下進行的。在自然條件下已經(jīng)知道肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化可以在小鼠體內(nèi)進行,奈瑟氏菌細胞自溶所釋放的DNA可以轉(zhuǎn)化周圍的細胞。細菌轉(zhuǎn)化的生物學意義還有待于進一步研究。在不能或不易通過細菌接合或轉(zhuǎn)導作遺傳學分析的細菌中,轉(zhuǎn)化可以作為一種研究的手段。
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