分子生物學(xué)原理：

細(xì)菌體中含有大量蛋白質(zhì)，具有不同的電荷和分子量。強(qiáng)陰離子去污劑SDS與某一還原劑并用，通過加熱使蛋白質(zhì)解離，大量的SDS結(jié)合蛋白質(zhì)，使其帶相同密度的負(fù)電荷，在聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）上，不同蛋白質(zhì)的遷移率僅取決于分子量。采用考馬斯亮蘭快速染色，可及時(shí)觀察電泳分離效果。因而根據(jù)預(yù)計(jì)表達(dá)蛋白的分子量，可篩選陽性表達(dá)的重組體。

分子生物學(xué)操作步驟：

1．取出試劑盒室溫平衡30min，取出血樣放至室溫。

2．配標(biāo)準(zhǔn)品：取150uL標(biāo)準(zhǔn)品加入150uL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋，依次稀釋5次。

3．加樣：分別于各反應(yīng)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50uL，樣品40UL，標(biāo)準(zhǔn)品做復(fù)孔，樣品做3孔。

4．分別于樣品孔中加入10UL抗體。

5．標(biāo)準(zhǔn)品和樣品孔中分別加入50uL鏈酶親和素-HRP，蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻，37℃溫育60min。

6．配洗滌液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

7．洗滌：小心揭開封板膜，棄去液體，甩干，每孔分子生物學(xué)加200uL 洗滌液，靜置30s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

8．顯色：每孔先加入顯色劑A 50uL，再加顯色劑B50uL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色6min。

9．終止：每孔加入終止液50uL，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立即轉(zhuǎn)為黃色）。

10．測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度。測(cè)定應(yīng)在加終止液10min之內(nèi)進(jìn)行。

分子生物學(xué)特點(diǎn)：

一、高效、靈敏、特異的抗體。

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性。

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體。

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型。

五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。