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雞碳酸酐酶(CA)ELISA試劑盒操作步驟

時間:2020/7/23閱讀:209
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雞碳酸酐酶(CA)ELISA試劑盒操作步驟:

 1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

 

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