細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無(wú)菌條件下，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長(zhǎng)和繁殖的方法。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞，以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。

一、培養(yǎng)細(xì)胞之前——準(zhǔn)備事項(xiàng)

1、耗材的處理、

玻璃器皿的清洗，對(duì)于玻璃器皿(細(xì)胞瓶、裝營(yíng)養(yǎng)液的瓶子、小青霉su瓶等)要用洗衣粉刷干凈(注意死角)，然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗數(shù)遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過(guò)程要使勁搖晃。

2、試劑的配置

試劑配置，細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

3、無(wú)菌檢驗(yàn)

無(wú)菌檢驗(yàn)，主要采用過(guò)濾除菌：如yi酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷an酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如 PBS、D-Hank's等。

不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求是不同的，要根據(jù)自己的細(xì)胞要求使用。

二、細(xì)胞培養(yǎng)中最重要的步驟——無(wú)菌操作

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺(tái)以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并開(kāi)啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。

每次操作只處理一株細(xì)胞株，避免細(xì)胞間交叉污染。

實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，再次以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。實(shí)驗(yàn)用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無(wú)菌區(qū)域，一般不要再邊緣區(qū)域操作。

三、細(xì)胞培養(yǎng)后期——定期觀察

你最好做到每天都去探望探望它們，看看他們的成長(zhǎng)情況

1、檢查培養(yǎng)液顏色與透明度的變化，顏色變黃，說(shuō)明PH值下降;變紅或紫紅色，說(shuō)明PH值上升，細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、死亡，一般生長(zhǎng)穩(wěn)定的細(xì)胞2-3天換液一次，生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞可3-4天換液一次。

2、觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底的80%，應(yīng)及時(shí)傳代。

3、觀察細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓清晰為佳。

4、注意微生物污染，常常出現(xiàn)培養(yǎng)液混濁，液體內(nèi)漂菌絲或細(xì)胞菌，不僅僅指微生物，包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物及細(xì)胞。

四、細(xì)胞培養(yǎng)之——污染篩查
你培養(yǎng)的細(xì)胞被污染了，無(wú)非是下面幾個(gè)污染途徑：

1、空氣是微生物傳播的最主要途徑，操作時(shí)盡量避免說(shuō)話、咳嗽、打噴嚏;

2、使用的培養(yǎng)器械及器皿清洗消毒不*;

3、培養(yǎng)兩種以上細(xì)胞時(shí)，操作不規(guī)范，可能導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染;

4、血清有問(wèn)題，可能血清在生產(chǎn)時(shí)就已經(jīng)被支原體或病毒污染;

5、原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來(lái)源于組織樣本。