細胞培養(yǎng)泛指所有體外培養(yǎng)，其含義是指從動物活體體內(nèi)取出組織，于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的體內(nèi)條件下，進行孵育培養(yǎng)，使之生存并生長。通過細胞培養(yǎng)得到大量的細胞或其代謝產(chǎn)物。因為生物產(chǎn)品都是從細胞得來，所以可以說細胞培養(yǎng)技術是生物技術中最核心、最基礎的技術。細胞培養(yǎng)工作現(xiàn)已廣泛應用于生物學、醫(yī)學、新藥研發(fā)等各個領域，成為最重要的基礎科學之一。

細胞培養(yǎng)具體過程：

一、復蘇

1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(注意防止蓋子不緊致使液體進入凍存管)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來)，1000轉離心5分鐘。

3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。

4.標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。

5.根據(jù)細胞增長速度2-3天換一次培養(yǎng)基。

二、傳代

1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

2.把原有培養(yǎng)基吸掉。

3.加適當?shù)膟i蛋白酶(能覆蓋細胞就行)，消化1-2分鐘。

4.細胞都變圓后加入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

5.用移液槍吹打細胞，讓細胞懸浮起來。

6.把細胞吸到10ml或15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。

7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。

8.根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。

三、凍存

把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。

凍存液的配制:70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。