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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營產(chǎn)品： 氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計 |
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高效液相色譜儀對奶粉中?；撬徇M行分析
2024-12-12 閱讀(38)
前言?；撬崾且环N含硫氨基酸，廣泛分布于體內(nèi)各個組織和器官，且主要以游離狀態(tài)存在于組織間液和細胞內(nèi)液中，最先于公牛膽汁中發(fā)現(xiàn)而得名。長期以來一直被認為是含硫氨基酸的無功能代謝產(chǎn)物，后來經(jīng)諸多研究發(fā)現(xiàn)，?；撬崾钦{(diào)節(jié)機體正常生理活動的活性物質(zhì)，且具有多種功能，是人體必需的重要氨基酸。人乳中牛磺酸含量很高，是主要的游離型氨基酸，而牛乳中?；撬岷繀s非常少。因此，?；撬嵋驯蛔鳛闋I養(yǎng)強化劑添加在奶粉及其他各類兒童營養(yǎng)食品中，可以促進嬰幼兒腦組織和智力的發(fā)育、提高新陳代謝能力，對寶寶的健康發(fā)展起著至關(guān)重要的作用。我國食品安全國家標(biāo)準規(guī)定，推薦嬰兒配方食品中添加?；撬醄1]。?；撬岬臋z測方法有很多，目前常用的方法是柱前或柱后衍生化高效液相色譜法。例如現(xiàn)行國標(biāo)就是使用鄰苯二甲醛(ortho-phthalaldehyde, OPA) 柱后衍生以及單磺酰氯柱前衍生法[2]。柱后衍生法利用牛磺酸與 OPA 在堿性條件下生成相應(yīng)的衍生物，通過用熒光檢測器來測定衍生物的含量，該法具有方法穩(wěn)定、干擾小、重現(xiàn)性較好及回收率較高等優(yōu)點，但是柱后衍生需要使用離子交換柱，離子交換柱通用性不好，不同供應(yīng)商色譜柱一致性很差，安裝了柱后衍生裝置的液相色譜儀器通用性也很差，且裝置較為昂貴，所以具有很大的局限性。柱前衍生方法利用單磺酰氯在堿性條件下與牛磺酸進行衍生化反應(yīng)，在紫外或熒光條件下測定牛磺酸的含量，該法需要人工進行復(fù)雜且要求苛刻的衍生操作（衍生劑必須每次臨用前現(xiàn)配、衍生過程需要避光等），衍生需要的時間很長而且衍生物不穩(wěn)定，需衍生后立即進樣分析，方法的檢測靈敏度也較低。早期也有使用靈敏度更高、且衍生反應(yīng)快速的 OPA 作為衍生劑的手動柱前衍生的方法[3-4]，但因衍生產(chǎn)物的半衰期比丹磺酰氯的短很多，手動衍生因無法嚴格控制衍生時間的長短而重現(xiàn)性很差，
所以方法的局限性更大。安捷倫全自動氨基酸分析方法[5] 使用 OPA 作為衍生劑在自動進樣器內(nèi)完成全自動衍生，既克服了 OPA 作為柱前衍生劑的缺點，又保留了 OPA 衍生劑的優(yōu)點，極大地提高了方法的穩(wěn)定性及可靠性。安捷倫公司北京實驗室及一些用戶[6] 借助標(biāo)準的安捷倫全自動氨基酸分析方法[7] 及試劑包并對其進行簡化、利用單磺酰氯衍生方案的樣品前處理步驟及色譜分析條件，完成了對牛磺酸的分析。隨著安捷倫公司對全自動氨基酸分析方法的改進[8] 及新色譜柱的出現(xiàn)，對?；撬岱治龇椒ǖ男阅苡辛诉M一步提高的空間，也需要分析速度更快、靈敏度更高且更合理的?；撬岱治龇椒?。本研究采用的?；撬釡y定方法是在安捷倫全自動氨基酸分析方法[8]及試劑的基礎(chǔ)上，結(jié)合 OPA 分析?；撬岬奈墨I[3-4] 對方法進行了易用性及合理性的改善。同時，靈敏度的提高使之僅用紫外檢測器就可檢出未強化奶粉中?；撬岬谋镜缀俊?/p>
實驗部分試劑和樣品乙腈（迪馬公司）為色譜純；醋酸銨 (Sigma)、5-磺基水楊酸(CNW) 為優(yōu)級純。所用的實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水；?；撬釋φ掌芳八袠悠肪鶃碜园步輦惖目蛻?。衍生試劑選用安捷倫氨基酸分析套件中的硼酸緩沖鹽（部件號5061-3339）及 OPA（部件號 5061-3335，這是已經(jīng)與 3-巰基丙酸混合并溶于 0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液中、配制好的 OPA）。
儀器和設(shè)備采用 Agilent 1220 Infinity 液相色譜儀系統(tǒng)（部件號 G4294B），配備：二元梯度泵（內(nèi)置脫氣機）、自動進樣器、柱溫箱及 DAD檢測器?？刂萍皵?shù)據(jù)處理軟件使用 OpenLab Chemstation，版本C.01.10。色譜柱選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 4.6 × 50 mm,2.7 μm（部件號 699975-902）。標(biāo)樣配制準確稱取 0.1000 g ?；撬針?biāo)準品，用水溶解并定容至 100 mL，得到 1 mg/mL 牛磺酸標(biāo)準儲備液。將該?；撬針?biāo)準儲備溶液用水稀釋配制一系列標(biāo)準溶液，標(biāo)準系列濃度為 0.5、2.0、5.0、10.0及 20.0 μg/mL，臨用前現(xiàn)配。
樣品前處理配制 0.2 mol/L 磺基水楊酸溶液：稱約 5 g 的 5-磺基水楊酸（帶 2分子水）溶于 100 mL 水中。配制及處理樣品：稱取約 5 g 奶粉溶于 40 mL 熱水（約 40 °C）中，充分搖動混勻后靜置。將該奶粉溶液與 0.2 mol/L 磺基水楊酸溶液 1:1 充分混合（各 5 mL）后靜置 10 分鐘，靜置后置于高速離心機，13000 轉(zhuǎn)離心 5 分鐘。取上清液用 0.2 μm 過濾膜（水溶性）過濾后使用。加標(biāo)樣品配制前加標(biāo)樣品：溶解奶粉之前，加入 20 μg/mL 標(biāo)樣 5 mL，剩下步驟與處理樣品一致。相當(dāng)于在樣品中添加了 1.25 μg/mL 的牛磺酸。后加標(biāo)樣品：處理好并過濾后的樣品溶液與 20 μg/mL 標(biāo)樣等體積混合。相當(dāng)于樣品的?；撬釢舛葴p半，再加上 10 μg/mL 的?；撬?。
