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伊萊博生物科技（上海）有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè),大中小型動(dòng)物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù) |
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| 參考價(jià) | ￥ 200 |
| 訂貨量 | 1 件 |
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更新時(shí)間：2023-10-30 08:44:37瀏覽次數(shù)：2265
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免疫熒光實(shí)驗(yàn)?原理
將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
免疫熒光實(shí)驗(yàn)流程
單標(biāo)記方法
免疫熒光單標(biāo)記是指只標(biāo)記一種蛋白質(zhì)分子，方法比較簡(jiǎn)單，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問(wèn)題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會(huì)直接影響染色結(jié)果。具體染色方法如下。
1、所需材料與試劑
a, 培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達(dá)到60%-70%的細(xì)胞。
b, 一抗、FITC或TRITC標(biāo)記的二抗。
c, 4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃預(yù)冷20 min)。
d, 封閉液。
e, 0.01mol／LPBS緩沖液。
2、染色方法
a, 取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片或glass-bottom培養(yǎng)皿，用0.01MPBS洗2-3遍。
b, 加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rain
c, 加入4%多聚甲醛試問(wèn)固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min。
d，正常阻斷血清1:20封閉試問(wèn)20-30 min，抑制IgG的非特異性結(jié)合。阻斷血清選擇與二抗同一種屬的正常血清。
e, 去掉正常血清，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃過(guò)夜。抗體以0.01 mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定)。
f, 0.3% TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min，0.3% TritonX 5 min，0.01 M PBS洗5 rain。
g, 加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。
h, 0.3%TritonX-100洗5rain，0.01 mol/LPBS洗5min，0.3% Triton X 5min，0.01mol/LPBS洗5 min，用濾紙吸干。
i, 90%甘油(PBS配制)封片。
j, 激光掃描共焦顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。
雙標(biāo)記方法
免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，應(yīng)注意所用的一抗是來(lái)自不同種屬動(dòng)物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來(lái)自家兔；B抗體為單克隆抗體，來(lái)自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠(yuǎn)離，通?？梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來(lái)組合。通常情況下，染色時(shí)兩種一抗可以同時(shí)孵育，然后可以同時(shí)孵育兩種二抗。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強(qiáng)時(shí)，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。其他步驟同**熒光單標(biāo)記。
客戶(hù)提供
細(xì)胞株或細(xì)胞爬片。注：細(xì)胞爬片不宜太密；細(xì)胞固定。組織切片，一抗
公司提供
基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡拍攝
實(shí)驗(yàn)周期：1-3周
伊萊博生物擁有豐富的研究經(jīng)驗(yàn)，具備完善的系統(tǒng)化管理能力和科研服務(wù)體系。目前已自建細(xì)胞、分子、病理等實(shí)驗(yàn)平臺(tái)近1000平方米，擁有的儀器設(shè)備、細(xì)胞庫(kù)、樣本保存庫(kù)等。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心近1800平方米，可滿(mǎn)足同時(shí)飼養(yǎng)清潔級(jí)和SPF級(jí)動(dòng)物。核心實(shí)驗(yàn)技術(shù)團(tuán)隊(duì)主要來(lái)自中國(guó)科學(xué)院大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)等重點(diǎn)高校及科研機(jī)構(gòu)，能夠?yàn)榭蛻?hù)提供研究方案策劃、項(xiàng)目實(shí)施及項(xiàng)目深度分析等方面的技術(shù)支持。公司目前參與研究項(xiàng)目已經(jīng)涵蓋心腦血管、腫瘤、內(nèi)分泌、生殖、免疫、神經(jīng)等諸多領(lǐng)域。
