高濃度低生長因子基質膠 是一種可溶性的基底膜基質膠，這種基質是通過基因編輯技術將多種表達膠原蛋白的基因序列插入到經永生化處理的小鼠細胞體系中，并在實體中抽提出來的。它的主要成分是層粘連蛋白，接著是膠原蛋白IV、硫酸乙酰素蛋白多糖和巢蛋白。基底膜基質也含有轉化生長因子β、表皮生長因子、類胰島素生長因子、成纖維細胞生長因子和在中自然出現(xiàn)的其他生長因子

推薦應用

     本系列分為標準高濃度和低因子高濃度，其濃度和粘度均高于普通濃度的基質膠，更適用于體內實驗(動物模型)，如PDX、CDX、體外血管生成實驗。

產品信息

產品參數(shù)

來源：小鼠

外觀：①顏色：含酚紅基質膠表現(xiàn)為黃色-粉紅色，無酚紅基質膠表現(xiàn)為半透明淡黃色； ②形態(tài)：標準型基質膠4℃溶解后，呈透明流動液態(tài)狀態(tài)；高濃度基質膠0℃溶解后，呈透明流動液態(tài)狀態(tài)，4℃久置呈半凝膠狀。

濃度多樣性： 蛋白濃度范圍在8~26mg/mL之間

內毒素： ≤ 4.5EU/ mL

凝膠時間：室溫條件下5-30min凝膠，溫度22°C至37°C時成膠速度加快

2D/3D應用非常廣泛：干細胞研究(分化、維持）、研究（侵襲）、 3D細胞培養(yǎng)（類器官、3D細胞球）、體內植入（皮下、血管生成、栓塞）

產品質量控制規(guī)范

• 通過小鼠抗體產物（MAP）檢測進行常規(guī)小鼠菌落病原體篩選

• 提取自不含LDEV的小鼠細胞

• 對包括LDEV在內的多種病原體進行廣泛的PCR檢測， 確保對生產過程中使用的原材料進行嚴格控制

• 對細菌、真菌和支原體進行檢測，確保陰性

• 使用BCA方法測定蛋白濃度

• 使用血清學方法檢測內毒素水平

• 在37℃下進行14天的凝膠穩(wěn)定性測試

• 每批次產品進行生物學功能驗證（類器官培養(yǎng)與分化實驗；皮下成瘤實驗；干細胞培養(yǎng)；血管生成實驗等）

• 對包括LDEV在內的多種病原體進行廣泛的PCR檢測， 確保對生產過程中使用的原材料進行嚴格控制

使用注意事項

實驗環(huán)境

 • 環(huán)境溫度：20–25℃ ；環(huán)境濕度：40–60%。

 • 請穿戴個人防護裝置，注意實驗室安全。

溫度控制  

• 基質膠產品儲存在-20℃時是穩(wěn)定的。通過分裝并一次性使用分裝物來盡可能減少產品的凍融次數(shù)。在-20℃冰箱中儲存分裝物直到準備使用。請不要儲存在無霜冰箱中。請務必保持產品的凍存狀態(tài)。

• 因為?；?strong>高濃度低生長因子基質膠 在10℃以上會開始凝膠化。所以需謹記：模基生物高濃度低生長因子基質膠 和所有與?；?strong>高濃度低生長因子基質膠 接觸的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基都應該預冷。在實驗的全部過程中請務必保持?；?strong>高濃度低生長因子基質膠 處于冰上。

避免污染

• 實驗操作人員需嚴格區(qū)分實驗操作臺、清潔區(qū)和污染區(qū)，確保插取吸頭、加樣、丟棄吸頭的動作呈單向流動。

• 實驗后使用含 0.5% 次氯酸的消毒液對實驗操作區(qū)消毒。

其他

• 請將基質膠產品小瓶淹沒在碎冰中，并放置在4℃冰箱里過夜解凍模基生物基質膠，蛋白濃度高時可能需要更多時間。請將模基生物高濃度低生長因子基質膠 全程保持在冰上。無論是開蓋取用產品或者對產品進行分裝，請保持無菌操作。

• 操作過程中，需使用預冷的移液管輕柔地吹打混勻?；?strong>高濃度低生長因子基質膠 以確保其均勻性。將?；?strong>高濃度低生長因子基質膠 分裝到離心管中，每當?；?strong>高濃度低生長因子基質膠 堵塞吸頭和/或移液管測量不精確時請更換吸頭。如果將產品放置在4℃的冰上 24-48個小時，凝膠化的?；?strong>高濃度低生長因子基質膠 可能會被重新水化。

操作說明

分裝操作說明

    基質膠產品儲存在-20℃時是穩(wěn)定的。通過分裝并一次性使用分裝物來盡可能減少產品的凍融次數(shù)。以下為實驗操作者進行分裝操作說明。

1.將基質膠置于預冷盒或碎冰中，放入 4℃冰箱，過夜解凍。

2.將無菌離心管、無菌槍頭等接觸基質膠的耗材放預冷盒中或冰箱中預冷，分裝前將融化好的基質膠表面清潔后放入預冷盒或碎冰上。

3.在潔凈工作臺中，用1mL移液槍吸取250µL基質膠到離心管里(或根據每次用量多少進行分裝)，標注好信息，操作過程中盡量保持低溫，縮短操作時間。

4.分裝完成后放冰盒中，防止傾倒，并于冰箱保存。分裝后放置于-20℃冰箱中儲存?zhèn)溆?。請不要儲存在自動除霜的冰箱中儲存。使用前將基質膠插入預冷盒或碎冰中，并放置于4°C冰箱中，在冰上過夜解凍，使基底膜基質膠在穩(wěn)定的低溫環(huán)境中緩慢充分融化。

使用方法說明

包被涂層方法   

    ?；?strong>高濃度低生長因子基質膠可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細胞，厚層凝膠法允許您在三維基質內培養(yǎng)細胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復雜的蛋白質層，您可以在其上培養(yǎng)細胞。您的選擇基于您想要實現(xiàn)的最終結果，無論是細胞生長、附著還是分化。

一、薄層凝膠法

1.依照推薦的方法解凍模基生物基底膜基質。使用預冷的移液管，將?；?基底膜基質混合至均勻。

2.將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 µl/cm2 向生長表面加入模基生物 基底膜基質。

3.將培養(yǎng)板放置在 37 ℃，30 分鐘。

4.如果有必要的話，請在使用無血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

二、薄層包被法

1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|。使用預冷的移液管，將?；?基底膜基質混合至均勻。

2.使用無血清培養(yǎng)基將模基生物基底膜基質稀釋到需要的濃度。對于您的實驗應用，您應該完成以經驗為主的研究來確定您的最適包被濃度。

3.向被包被的容器中加入稀釋的?；?基底膜基質。加入的量應該足以容易地覆蓋整個生長表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個小時。

4.吸出未結合的材料并使用無血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

三、厚層凝膠法

1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|。使用預冷的移液管，將模基生物 基底膜基質混合至均勻。

2.將培養(yǎng)板放置在冰上。向?；锘啄せ|中加入細胞并使用預冷的移液管懸浮。以150-200µl/cm2 向生長表面加入?；?基底膜基質。

3.將培養(yǎng)板放置在37℃，30分鐘?，F(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。

細胞復蘇：

   使用細胞復蘇溶液在冰上 7 小時內解聚?；锘啄せ|能夠實現(xiàn)將生長在模基生物基底膜基質上的細胞zuiyouyxiao地復蘇，或者使用zhongxingdanbaimei，考慮到連續(xù)培養(yǎng)，zhongxingdanbaimei作為一種金屬酶可以分散細胞。

應用操作說明

   以下以小鼠皮下成瘤實驗為例來進行?；?strong>高濃度低生長因子基質膠的應用實驗操作說明。

一、實驗目的

1、熟練掌握小鼠皮下成瘤技術

2、了解掌握多種細胞株皮下成瘤技術

3、觀察小鼠皮下接種細胞體內成瘤形態(tài)的變化

二、實驗原理

    皮下成瘤實驗（包括了PDX，CDX和Syngeneic）是將細胞或組織通過原位或皮下移/植到小鼠體內使其成瘤，在免疫學、藥品與生物制品的安全性評價及有效藥品的篩選等實驗方面，有著很高的研究價值。相對于單純的細胞種植，混合基質膠后可顯著提高，縮短成瘤時間，其主要原因是基質膠為細胞在接受宿主營養(yǎng)之前提供充足營養(yǎng)環(huán)境，起到橋梁的作用。實驗一般選擇4-8周齡的小鼠，雌雄均可，接種部位選擇皮下。一般一只小鼠接種細胞數(shù)量為1~5×106個細胞，倫理學要求不能超過1×107細胞/只，接種后2-3周出現(xiàn)肉眼較明顯的瘤塊（具體根據細胞、增殖速度、細胞接種量、小鼠品系等因素有所不同）。

三、實驗儀器、材料

1、儀器：生物安全柜、細胞培養(yǎng)箱、低溫水平式離心機、倒置顯微鏡

2、材料：無菌槍頭；10 cm細胞培養(yǎng)皿；無菌EP管；一次性注射器等耗材，可根據實驗設計自行調整

3、試劑：基質膠、基礎培養(yǎng)基、含10%胎牛血清培養(yǎng)基、1×PBS、yimei細胞消化液

四、實驗內容與方法

4.1實驗準備：

將基質膠置于特制的冰盒內，于4℃冰箱中過夜緩慢融化；

4.2 細胞準備：

4.2.1選取狀態(tài)良好的、對數(shù)生長的細胞，棄上清，加入2 mL 1×PBS溶液輕輕晃動清洗，棄掉液體。

4.2.2加入1 mL 0.25%yimei細胞消化液到培養(yǎng)皿中，靜置10秒后，棄掉yimei，用殘留的yimei繼續(xù)室溫消化1~3分鐘。

4.2.3待細胞變圓時（切記不可消化到細胞邊緣透亮），加入1 mL含10%胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化。小心將細胞吹散，制成細胞懸液收集至15 mL塑料離心管中。

4.2.4 1000 rpm離心3分鐘，棄上清。PBS清洗細胞1次后，加入無血清基礎培養(yǎng)基重懸細胞，取10 μL細胞懸液進行細胞計數(shù)。

4.2.5

? HepG2細胞：每只小鼠接種500萬個細胞。根據細胞密度取所需細胞懸液至無菌1.5 mL塑料離心管中，1000 rpm離心3分鐘，棄上清，補充無血清培養(yǎng)基或PBS至總體積為300 μL。對于空白對照組，因不需要與基質膠混合，只需終濃度制備成5×107 個細胞/mL即可，取600μL備用。

? HCT-116細胞：每只小鼠接種100萬個細胞。根據細胞密度取所需細胞懸液至無菌1.5 mL塑料離心管中，1000 rpm離心3分鐘，棄上清，補充無血清培養(yǎng)基或PBS至總體積為300 μL。對于空白對照組，因不需要與基質膠混合，只需終濃度制備成1×107 個細胞/mL即可，取600μL備用。

? MIA-PaC-2細胞：每只小鼠接種1000萬個細胞。根據細胞密度取所需細胞懸液至無菌1.5 mL塑料離心管中，1000 rpm離心3分鐘，棄上清，補充無血清培養(yǎng)基或PBS至總體積為500μL。對于空白對照組，因不需要與基質膠混合，只需終濃度制備成5×107 個細胞/mL即可，取1000μL備用。

2.4 基質膠混合：將細胞懸液和基質膠在4℃環(huán)境下按1:1比例混勻?？瞻讓φ战M可直接進行皮下/注射。

2.5皮下/注射：左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右側背部皮下/注射，接種時，針頭在皮下進針深一點，約1 cm深，以減少注射后細胞懸液從針眼溢出，接種體積為100 μL。MIA-PaC-2細胞需注射200 μL/只。

2.6記錄數(shù)據：將裸鼠放回籠內繼續(xù)飼養(yǎng)，根據實驗需要定期測量瘤體體積，記錄數(shù)據做出曲線，并在體積不超過2000 mm3前對裸鼠進行Euthanasia，取出