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貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
SH0103 | 乙醇含量檢測試劑盒(微量法100T/96S) | 100管/96樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
乙醇俗稱酒精，是最常見的一元醇，在檢測酒的質(zhì)量、分析血液乙醇含量和果蔬品質(zhì)判斷中通常需要頻繁、大量地檢測乙醇含量。
1.乙醇是酒的主要成分，是衡量酒質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。我國是shijiesahngzui早發(fā)明釀酒的國家，也是酒類產(chǎn)品消費大國，其消費量居世界zhishou。因此，快速、準(zhǔn)確測定酒中乙醇含量，對于確保酒的質(zhì)量和保護消費者的健康具有重大意義。
2.乙醇是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最基本的抑制物，如果乙醇被大量攝入，會不可逆抑制呼吸甚至導(dǎo)致死亡，血液中乙醇檢測結(jié)果通常作為認(rèn)定是否酒后駕駛或醉酒駕駛的依據(jù)。
3.乙醇是判斷儲藏過程中果蔬品質(zhì)變化的重要指標(biāo)，研究表明，適當(dāng)?shù)囊掖继幚砟軌驕p少腐爛和減輕果蔬生理病害、延緩果蔬成熟和衰老進程，從而延長貨架壽命。因此，簡便、準(zhǔn)確和快速測定果蔬中乙醇含量具有非常重要的意義。
測定原理：
乙醇在乙醇脫氫酶的催化下氧化脫氫生成乙醛，同時，NAD被還原生成NADH，NADH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色，通過450 nm下測定吸光值變化可測得乙醇含量。
組成：
產(chǎn)品名稱 | SH0103-100T/96S | Storage |
試劑一：液體 | 12ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1瓶 | -20℃ |
試劑三：液體 | 10 ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 1.5ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
試劑二：粉劑×1瓶, -20℃保存；臨用前加入6 ml試劑三充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存；
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
乙醇提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml蒸餾水），進行勻漿，8000g，25℃離心10min，取上清待測。
2. 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：蒸餾水體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml蒸餾水），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）， 8000g，25℃離心10min，取上清待測。
3. 血清（漿）等液體樣品：直接測定。
測定步驟：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。
2. 工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液
試劑名稱 | 體積（μl） |
試劑一 | 100 |
試劑二 | 50 |
試劑四 | 10 |
3. 樣本測定
按下表在96孔板中加入如下試劑
試劑名稱 | 體積（μl） |
樣本 | 40 |
測定工作液 | 160 |
混勻后記錄450nm下測定初始吸光值A1，和37℃避光孵育10min后的吸光值A2，計算
△A=A2-A1。
乙醇含量計算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0256x + 0.0055 R2 = 0.9991；
x為乙醇含量（μmol/ml），y為吸光值差值△A。
1. 按照血清（漿）體積計算
乙醇含量（μmol/ml）= (△A-0.0055)÷0.0256
=39.1×(△A-0.0055)
2. 按照樣品質(zhì)量計算
乙醇含量（μmol/g鮮重）= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷(W ×V1÷V2）
= 39.1×(△A-0.0055)÷W
3. 按照細菌或細胞密度計算
乙醇含量（μmol/104 cell）= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷（500×V1÷V2）
=0.078×(△A-0.0055)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V2：加入提取液體積，1 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬；
注意事項：
測定前取1-2個樣做預(yù)實驗，若△A﹥0.3或乙醇含量﹥10μmol/ml，需將樣本用蒸餾水稀釋后再測定，以確保測定的準(zhǔn)確性。
zuidi檢測限：0.02μmol/ml。
