6
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
SH0057 | 總巰基測定試劑盒(分光光度法50T/24S) | 50管/24樣 |
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
生物體內巰基主要包括guguanggantai巰基和蛋白質巰基。前者不僅能夠修復氧化損傷的蛋白質，而且參與活性氧清除，后者對于維持蛋白質構象具有重要作用。通過測定總巰基含量和GSH含量，能夠間接測定蛋白質巰基含量。
測定原理：
巰基基團與5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。
組成：
產品名稱 | SH0057-50T/24S | Storage |
試劑一：液體 | 40ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 2ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
天平、研缽、可見分光光度計、恒溫水浴鍋、1ml玻璃比色皿、乙醇和蒸餾水。
樣品的制備：
1. 按照組織質量（g）：水體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2. 血清，培養(yǎng)液：稀釋5倍后測定，可取0.1ml樣本，加入0.4ml蒸餾水，混勻，置冰上待測。
測定操作表：
1、分光光度計預熱30min，調節(jié)波長至412nm，雙蒸水調零。
2、操作表
在1ml玻璃比色皿中加入如下試劑
對照管 | 測定管 | |
樣品（μl） | 200 | 200 |
試劑一（μl） | 750 | 750 |
試劑二（μl） | 50 | |
乙醇（μl） | 50 | |
混勻，25℃靜置10min， 測定412nm吸光值，ΔA=A測定-A對照。每個測定管設一個對照管。 | ||
計算公式：
總巰基標準曲線：y =3.6222 x- 0.0037，R2 = 1，x為標品濃度，單位μmol/ml， y為吸光度ΔA。
1. 組織：
（1）按樣本重量計算
總巰基含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×V樣總÷W
=0.276×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
總巰基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×V樣總÷Cpr
=0.276×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培養(yǎng)液：
總巰基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×5×103
=1380×（ΔA+0.0037）
V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；5：血清，培養(yǎng)液等液體樣本稀釋倍數(shù)；103 ：1mmol/L=103μmol/ L
注意事項：
zuidi檢出限為10μmol/L。
