產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

蛋白磷酸化改變是許多人類癌癥的一個特征，可以作為治療的靶點。磷酸化肽段的濃縮是zuida限度地 擴大MS對磷酸化蛋白質(zhì)組覆蓋深度的關(guān)鍵步驟，但由于其高度的復(fù)雜性，對于組織標本來說仍然具有 挑戰(zhàn)性。

2017年，本研究院團隊shouci在血漿外泌體中發(fā)現(xiàn)大量的磷酸化蛋白 (PNAS,2017)。該文展示了一種 從人血漿中分離和鑒定細胞外囊泡(EVs)中的磷酸化蛋白的策略，作為區(qū)分疾病和健康狀態(tài)的潛在標  記物。我們在從少量血漿樣本分離的EVs中發(fā)現(xiàn)了近10,000個dute的磷酸化肽段。利用無標記定量磷  酸化蛋白質(zhì)組學(xué)，我們在血漿EV中鑒定出144種磷酸化蛋白，在被診斷為乳腺癌的患者中顯著高于健  康對照組。使用平行反應(yīng)監(jiān)測進行靶向定量，在個體患者中驗證了幾個生物標志物。這項研究表明， 發(fā)展血漿EV中的磷酸化蛋白作為疾病生物標志物是高度可行的，并可能改變癌癥的篩查和監(jiān)測。

優(yōu)勢

1.可實現(xiàn)磷酸化肽段的高效富集。

2.適用于大多數(shù)復(fù)雜的樣品。

3.提供了zuijia的特異性和回收率。

原理

由于磷酸化的化學(xué)計量比較低，因此磷酸肽的濃縮是成功進行磷酸蛋白質(zhì)組學(xué)實驗的關(guān)鍵步驟。

PolyMAC提供了一種有效的、大大改進的方法來實現(xiàn)更完整的磷酸肽的富集化。這種高度選擇性的富  集法可以用于大多數(shù)復(fù)雜樣品，因為它提供了zuijia的專屬性和回收率。 PolyMAC是一種基于聚合物的  固定化金屬離子親和捕獲法，具有zhuoyue的磷酸化蛋白質(zhì)組覆蓋率和回收率。它是一種可溶性納米聚合 物，設(shè)計用于與溶液中的磷肽相互作用，隨后在固相載體上捕獲，用于洗滌和磷肽洗脫。與常用的eryanghuatai和固定化金屬離子親和捕捉法相比， PolyMAC具有更好的重現(xiàn)性和磷酸化肽段的富集性，磷酸  化肽段的選擇性接近95%,回收率>90%。重要的是，對于總蛋白磷酸化水平較低的樣品， PolyMAC具有 非常好的回收率和選擇性。

組分說明

儲存條件

將PolyMAC Beads儲存在4℃,孵育液洗滌液等儲存在室溫。

案例

圖3 PolyMAC與磷酸laoansuan富集(A,C 和E)或在pH值為8的RPLC分選進行總磷蛋白組識別(B,D 和F)的性能

我們描述了shouci使用基于聚合物的金屬離子親和捕獲器(PolyMAC)在HER2驅(qū)動的乳腺癌轉(zhuǎn)基因小鼠模  型上分析組織磷酸化蛋白質(zhì)組。通過將磷酸laoansuan免疫沉淀與PolyMAC相結(jié)合，從5次LC-MS/MS運行中 鑒定了411個具有139個磷酸laoansuan、45個磷酸siansuan和29個磷酸suansuan位點的dute多肽。將反相高效 液相色譜在pH8.0條件下與PolyMAC聯(lián)用，從8個LC-MS/MS運行中鑒定了1571個dute的多肽，其中1279個是磷酸siansuan，213個是磷酸suansuan，21個是磷酸laoansuan。線性基序分析表明，許多亞磷酸基序?qū)?/strong>應(yīng)于zhongsuozhouzhi的磷酸化基序。用藥物基因相互作用數(shù)據(jù)庫分析laoansuan磷酸化蛋白質(zhì)組發(fā)現(xiàn)了一個潛在 的治療靶點網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)以含有FDA批準的或處于臨床開發(fā)中的抑制劑的Src家族激酶為中心。這些結(jié) 果表明， PolyMAC非常適合于組織標本的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析。

說明書

操作具體示意圖如下

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