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本試劑盒是可用于細(xì)胞培養(yǎng)上清和體液樣本中細(xì)胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶聯(lián)免疫試劑。將能與細(xì)胞外囊泡表面的磷脂酰siansuan（PS）特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)預(yù)包被到板上，細(xì)胞外囊泡與其反應(yīng)被固定后，以目的細(xì)胞外囊泡表面標(biāo)記蛋白的shengwusu標(biāo)記抗體作為檢測一抗，以試劑盒中的HRP標(biāo)記鏈霉親和素為二抗，可高靈敏度檢測表面具有靶標(biāo)記蛋白的細(xì)胞外囊泡。同時，可用不同物種的shengwusu標(biāo)記抗體作為檢測一抗。此外，二抗采用HRP標(biāo)記鏈霉親和素，與血液成分的非特異性結(jié)合低，可高靈敏度檢測血液樣本中的細(xì)胞外囊泡。
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◆特點
● 高靈敏度和定量檢測
可以直接檢測樣本中的細(xì)胞外囊泡（無需分離）
可以從2.5 μL左右的血液樣本中檢測細(xì)胞外囊泡（節(jié)約樣本）
靈敏度是WB法的50~1000倍（檢測微量信號）
● 應(yīng)用廣泛
可定性或定量檢測培養(yǎng)上清和血液樣本中的細(xì)胞外囊泡
測定EV-depleted FBS中殘留的細(xì)胞外囊泡數(shù)量
使用凝集素分析外泌體的糖鏈
● 通用的shengwusu標(biāo)記檢測方法
一抗可靈活更換成不同動物來源的抗體或凝集素等的shengwusu標(biāo)記一抗
● 操作簡單以及再現(xiàn)性高
優(yōu)化細(xì)胞外囊泡檢測用的試劑盒和試劑
◆檢測原理
FUJIFILM Wako試劑盒PS Capture™ Exosome ELISA Kit（Anti Mouse IgG POD）（Code No. 297-79201）（圖右）中，一抗使用小鼠抗體，二抗使用抗小鼠IgG抗體，但是本試劑盒（圖左），使用shengwusu標(biāo)記抗體作為一抗，二抗使用HRP標(biāo)記的鏈霉親和素。因此，可以不受限于抗體種類分析細(xì)胞外囊泡。
◆試劑盒組成
試劑盒組成（96次用） | 容量 |
Exosome Capture 96 Well Plate | 1塊（8 well×12 strips） |
Reaction Buffer | 80 mL×1支 |
Washing Buffer (10×) | 100 mL×1支 |
Exosome Binding Enhancer (100×) | 10 mL×1支 |
Control Biotinylated Antibody Anti-CD63 (100×) | 120 μL×1支 |
HRP-conjugated Streptavidin (100×) | 240 μL×1支 |
TMB Solution | 12 mL×1支 |
Stop Solution | 12 mL×1支 |
Plate Seal | 4塊 |
使用說明書 | 1份 |
◆對應(yīng)樣本
樣本 | 定性分析 | 定量分析 |
細(xì)胞培養(yǎng)上清液 | 可以實現(xiàn)○ | 可以實現(xiàn)○ |
體液樣本 | 可以實現(xiàn)○ | 可以實現(xiàn)○ |
◆數(shù)據(jù)
■ 血液樣本以及培養(yǎng)上清液樣本的稀釋線性（Linearity）
用從COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清液中純化的細(xì)胞外囊泡制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線為基準(zhǔn)，檢測①人血清稀釋樣本，②人肝素血漿稀釋樣本，③人EDTA血漿稀釋樣本（各2個樣本，稀釋4次）以及④COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清液稀釋4次的樣本中的外泌體濃度（檢測CD63），評價各個樣本的稀釋線性。
結(jié)果表明，在CD63檢測中，血清和肝素血漿樣本在雙倍稀釋或更高稀釋度下可獲得良好的線性。EDTA血漿樣本在5倍以上稀釋度下可獲得良好的線性。
■ PS親和法和抗體法的比較（捕獲EVs的能力）
將預(yù)處理※1的各個細(xì)胞培養(yǎng)上清液分別添加至已固相化的抗CD抗體（CD9, CD63, CD81）或Tim4微孔板的各個孔中進(jìn)行反應(yīng)。然后，用各個shengwusu標(biāo)記抗CD抗體（CD9, CD63, CD81）檢測結(jié)合的外泌體。
※1 預(yù)處理條件: 10,000×g, 30分
PS親和法與抗體法相比，更高效率地捕抓到了各種細(xì)胞株來源的外泌體
■ 測定市面上“無外泌體血清"中殘留的外泌體數(shù)量
用shengwusu標(biāo)記抗CD9抗體※4檢測未處理的FBS，市場上售賣的“無外泌體血清"（ EV-depleted FBS）以及超離處理的FBS（UC-treated FBS）※3 中殘存的外泌體。
※3 超離條件：160,000×g, 16 h
※4 用Biotin Labeling Kit-SH（產(chǎn)品編號：348-90941）標(biāo)記抗CD9抗體（產(chǎn)品編號：014-27763）。
Capture: Tim4 / Detection：shengwusu標(biāo)記抗CD9抗體
使用PS親和法的ELISA系統(tǒng)，可以簡單便利地檢測到外泌體殘留量。
■ 應(yīng)用于糖鏈分析：rBC2LCN凝集素和Tim4的雙抗夾心ELISA
用shengwusu標(biāo)記抗CD63抗體（產(chǎn)品編號：019-27713）和shengwusu標(biāo)記rBC2LCN凝集素※6檢測預(yù)處理完成※5的5倍稀釋iPS細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的外泌體。
※5 預(yù)處理條件: 10,000 × g, 30 min
※6 用 EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin（ThermoFisher公司）標(biāo)記rBC2LCN（產(chǎn)品編號：029-18061）。
捕獲用抗體: Tim4 / 檢測用抗體: 各shengwusu標(biāo)記體
＜參考文獻(xiàn)＞ S. Saito, et al., Sci. Rep., 8, 3997 (2018)
通過與各種凝集素相組合，可應(yīng)用于外泌體表面上的糖鏈分析。
■ 檢測人正常血液樣本中外泌體標(biāo)記物的相對濃度
準(zhǔn)備人血清（10個樣本），EDTA血漿（9個樣本）和肝素血漿（9個樣本）作為正常血液樣本，檢測外泌體標(biāo)記物CD63和CD9，以及被認(rèn)為是癌細(xì)胞外泌體特異性標(biāo)記物的EpCAM。
結(jié)果顯示，在各個血液樣本中均檢測出了外泌體標(biāo)記物CD63和CD9，但只有在癌細(xì)胞外泌體中才檢測出極微量的表面抗原EpCAM。
■ COLO201來源純化外泌體的添加回收測試
準(zhǔn)備混合血清，EDTA血漿，肝素血漿的2倍稀釋液，并添加從COLO 201細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取的3種濃度的COLO201來源外泌體，以EpCAM檢測來確認(rèn)回收率。
在EpCAM檢測中，添加回收率在100％±10％的范圍內(nèi)，顯示出良好的回收性能※。
※ 考慮到【血液檢體的稀釋線性】，EDTA血漿樣本建議稀釋5倍以上進(jìn)行檢測。
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
298-80601 | PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（鏈霉親和素HRP） | 基因研究用 | 96 次 |
◆抗外泌體標(biāo)記抗體系列
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 交叉反應(yīng) | 包裝 |
018-27761 | Anti CD9, Monoclonal Antibody (1K) | 人，牛 | 20 µL |
014-27763 | 100 µL | ||
016-27061 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13) | 人 | 20 µL |
012-27063 | 100 µL | ||
015-27771 | Anti CD81, Monoclonal Antibody (17B1) | 人，牛 | 20 µL |
011-27773 | 100 µL | ||
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 偶聯(lián)基團 | 包裝 |
018-27641 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Fluorescein Conjugated | 綠色熒光素 | 25 次用 |
014-27643 | 100 次用 | ||
011-27751 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated | 紅色熒光素 | 25 次用 |
017-27753 | 100 次用 | ||
013-27711 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Biotin Conjugated | shengwusu | 20 µL |
019-27713 | 100 µL |
◆相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
299-77603 | MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS | 基因研究用 | 2 次 |
293-77601 | 10 次 | ||
297-79201 | PS Capture™ 外泌體ELISA 試劑盒（抗小鼠IgG POD） | 基因研究用 | 96 次 |
297-79701 | PS Capture™外泌體流式試劑盒 | 基因研究用 | 300 次 |
016-27061 | 抗CD63，單克隆抗體（3-13） | 免疫化學(xué)用 | 20 μL |
012-27063 | 100 μL |
※ 本頁面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。
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PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD）
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 |
