活性氧（ROS）是含有氧的化學(xué)活性分子。實(shí)例包括超氧化物，羥基自由基，單線態(tài)氧和過(guò)氧化物。由于存在不配對(duì)的價(jià)殼電子，ROS具有高反應(yīng)活性。ROS是氧正常代謝的天然副產(chǎn)物，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和體內(nèi)平衡中起重要作用。但是，在環(huán)境壓力（例如紫外線或熱暴露）期間，ROS水平可能會(huì)急劇增加。這可能會(huì)嚴(yán)重?fù)p壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。累積地，這稱為氧化應(yīng)激。MitoROS™580是一種超氧化物敏感性染料，在加載到活細(xì)胞中時(shí)位于線粒體中。MitoROS™580被超氧化物氧化會(huì)產(chǎn)生紅色熒光。MitoROS™580可用于通過(guò)熒光顯微鏡或熒光流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)線粒體中的超氧化物。MitoROS™580試劑滲透到活細(xì)胞中，并選擇性地靶向線粒體。它會(huì)被超氧化物迅速氧化。它不太可能被其他活性氧（ROS）和活性氮（RNS）氧化。氧化產(chǎn)物在細(xì)胞中是高度熒光的。MitoROS™580提供了一種有價(jià)值的工具，可用于研究各種病理學(xué)中的氧化應(yīng)激。

重要說(shuō)明
該協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。在制備MitoROS™580工作溶液之前，請(qǐng)根據(jù)需要處理細(xì)胞。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，制備后應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. MitoROS™580儲(chǔ)備溶液（1000X）
向MitoROS™580小瓶中添加13 µL DMSO，并充分混合。注意：未使用的儲(chǔ)備溶液可以在-20 ^o C 下保存  。避光。

準(zhǔn)備工作溶液

MitoROS™580工作溶液（2X）：
用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）將DMSO儲(chǔ)備溶液稀釋到Hanks溶液中，制成2X工作溶液。 注意： 2X MitoROS™580工作溶液不穩(wěn)定，請(qǐng)立即使用。

程序

1. 根據(jù)需要處理細(xì)胞。
    
2. 在37°C避光的條件下，用等體積的2X MitoROS™580工作溶液孵育細(xì)胞（例如100 µL /孔在96孔板上）。 注意： MitoROS™580的zui終細(xì)胞濃度不應(yīng)超過(guò)1X。濃度超過(guò)1 X會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用，包括改變線粒體形態(tài)以及熒光重新分布到細(xì)胞核和胞質(zhì)溶膠。 注意：  不同的細(xì)胞對(duì)MitoROS™580的反應(yīng)不同，請(qǐng)相應(yīng)地調(diào)整工作濃度。
    
3. 輕輕清洗細(xì)胞三遍，并用HHBS緩沖液替換。
    
4. 用適當(dāng)?shù)臒晒鈨x器（例如熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀）分析細(xì)胞，Ex / Em = 510/580 nm。

   16053	ROS Brite™活性氧熒光探針DHCF	ROS Brite™ DHCF	1 mg
   16055	Cell Meter™線粒體羥基自由基檢測(cè)試劑盒	Cell Meter™ Mitochondrial Hydroxyl Radical Detection Kit *Red Fluorescence*	200 Tests
   16060	Cell Meter™熒光法線粒體超氧化物活性檢測(cè)試劑盒	Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit *Green Fluorescence*	200 Tests