乳酸是手性的并且具有兩個(gè)光學(xué)異構(gòu)體：L-乳酸和D-乳酸。在代謝和運(yùn)動(dòng)過(guò)程中，丙酮酸經(jīng)常通過(guò)乳酸脫氫酶（LDH）從丙酮酸中產(chǎn)生。監(jiān)測(cè)乳酸水平是評(píng)估組織需氧量和利用之間平衡的好方法，對(duì)研究細(xì)胞和動(dòng)物生理學(xué)很有用。D-乳酸不被哺乳動(dòng)物代謝，其從體內(nèi)的清除主要取決于腎臟的排泄。D-乳酸和L-乳酸存在于許多發(fā)酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制的肉和魚(yú)中。D-乳酸和L-乳酸（由細(xì)菌產(chǎn)生）是食品（例如雞蛋，牛奶，果汁和葡萄酒）的質(zhì)量指標(biāo)。血液中D-乳酸的異常高濃度通常反映了胃腸道中細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)。AAT Bioquest的Amplite™乳酸檢測(cè)試劑盒（用于L-乳酸檢測(cè)的產(chǎn)品目錄號(hào)為13814和13815，用于D-乳酸檢測(cè)的產(chǎn)品目錄號(hào)為13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的檢測(cè)L-乳酸或D-乳酸的方法生物樣品，例如血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品中。在酶聯(lián)測(cè)定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過(guò)熒光NADH傳感器進(jìn)行專(zhuān)門(mén)監(jiān)測(cè)。信號(hào)可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™L-乳酸測(cè)定試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至1.4 µM L-乳酸。s Amplite™乳酸測(cè)定試劑盒（用于L-乳酸測(cè)定的產(chǎn)品目錄號(hào)為13814和13815，對(duì)于D-乳酸測(cè)定的產(chǎn)品目錄號(hào)為13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的方法，可用于檢測(cè)生物樣品中的L-乳酸或D-乳酸樣本，例如血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣本。在酶聯(lián)測(cè)定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過(guò)熒光NADH傳感器進(jìn)行專(zhuān)門(mén)監(jiān)測(cè)。信號(hào)可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™L-乳酸測(cè)定試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至1.4 µM L-乳酸。s Amplite™乳酸測(cè)定試劑盒（用于L-乳酸測(cè)定的產(chǎn)品目錄號(hào)為13814和13815，對(duì)于D-乳酸測(cè)定的產(chǎn)品目錄號(hào)為13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的方法，可用于檢測(cè)生物樣品中的L-乳酸或D-乳酸樣本，例如血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣本。在酶聯(lián)測(cè)定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過(guò)熒光NADH傳感器進(jìn)行專(zhuān)門(mén)監(jiān)測(cè)。信號(hào)可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™L-乳酸測(cè)定試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至1.4 µM L-乳酸。（D.乳酸檢測(cè)的Cat＃13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的方法，用于檢測(cè)血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品等生物樣品中的L-乳酸或D-乳酸。在酶聯(lián)測(cè)定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過(guò)熒光NADH傳感器進(jìn)行專(zhuān)門(mén)監(jiān)測(cè)。信號(hào)可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™L-乳酸測(cè)定試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至1.4 µM L-乳酸。（D.乳酸檢測(cè)的Cat＃13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的方法，用于檢測(cè)血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品等生物樣品中的L-乳酸或D-乳酸。在酶聯(lián)測(cè)定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過(guò)熒光NADH傳感器進(jìn)行專(zhuān)門(mén)監(jiān)測(cè)。信號(hào)可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™L-乳酸測(cè)定試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至1.4 µM L-乳酸。

組件

1. 準(zhǔn)備L-乳酸鹽工作溶液（50 µL）
2. 加入L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)液或測(cè)試樣品（50 µL）
3. 在室溫下孵育30分鐘-2小時(shí)
4. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm時(shí)的熒光增加

重要說(shuō)明
開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒成分的小瓶。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，制備后應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. NAD儲(chǔ)備溶液（100X）：
將100 µL H ₂ O加入NAD小瓶（組分C）中，制成100X NAD儲(chǔ)備溶液。

2. L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：
將200 µL H ₂ O或1x PBS緩沖液加到L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D）的小瓶中，制成100 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

向990 µL PBS緩沖液中加入10 µL L-乳酸原液，以生成1 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（Lac7）。取1 mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)垣@得L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（Lac6- Lac1）的連續(xù)稀釋液。注意：稀釋的L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

準(zhǔn)備工作溶液

將5 mL測(cè)定緩沖液（組分B）添加到一瓶酶探針（組分A）中。將50 µL NAD儲(chǔ)備溶液（100X）加入組分A的瓶子中，并充分混合。注意：此L-乳酸鹽工作溶液不穩(wěn)定，應(yīng)立即使用。