6
| 分子量 | 激發(fā)（nm） | 發(fā)射（nm） | |
| 292633-16-0 | 711.72 | 341 | 441 |
Caspase 9是半guangansuan蛋白酶caspase家族CED-3亞家族的成員，在凋亡的執(zhí)行階段起著至關重要的作用。這些酶對于天冬氨酸殘基后的切割鍵具有主要的一級特異性?！皢幼?胱天蛋白酶（例如胱天蛋白酶8）激活“效應子"胱天蛋白酶，例如胱天蛋白酶3和7。效應子胱天蛋白酶然后裂解細胞底物，zui終導致凋亡的形態(tài)學改變。Ac-LEHD-AMC是caspase 9的選擇性熒光底物。caspase9誘導的Ac-LEHD-AMC水解導致AMC熒光團的釋放，可通過?365 nm的激發(fā)波長和??的發(fā)射波長檢測到450 nm?？梢栽谟?0 mM MES，pH 6.5、10％PEG 8000、0.1％CHAPS，5 mM DTT，
重要的是要存放在<-15°C的環(huán)境中，并應存放在陰涼處。
自收到之日起12個月內(nèi)可以使用。
程序
以下協(xié)議僅提供指導，應根據(jù)您的特定需求進行修改。
使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常規(guī)解決方案胱天蛋白酶測定
在DMSO中準備10 mM的儲備溶液。
如下準備2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。
將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時。
使用熒光酶標儀讀取熒光，或使用酶標儀讀取吸光度。
使用細胞滲透性FMK Caspase探針的細胞Caspase測定
在DMSO中準備2-5 mM的儲備溶液。
根據(jù)需要處理細胞。
通過用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。
將等體積的處理過的細胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合（來自步驟2.3），并在37°C，5％CO 2的 培養(yǎng)箱中孵育細胞至少1小時。
用HHBS清洗細胞至少一次。
通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監(jiān)測熒光強度。
使用細胞滲透性FMK Caspase探針進行細胞半胱天冬酶測定 （僅適用于＃13470-13476）
通過向小瓶中加入50 µL DMSO制備250X儲備液。
根據(jù)需要處理細胞。
以1：250的比例將250 X DMSO儲備溶液添加到細胞溶液中（例如2 µL至500 µL細胞），并將細胞在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時。
用HHBS清洗細胞至少一次。
通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監(jiān)測熒光強度。
13427 Caspase 9熒光底物(Ac-LEHD)2-R110 綠 (Ac-LEHD)2-R110 1 mg 13430 Caspase 3/7熒光底物(Z-DEVD)2-R110 綠 (Z-DEVD)2-R110 1 mg
