中國(guó)科學(xué)院 | 分子量 | 激發(fā)(nm) | 發(fā)射(nm) | 消光系數(shù)(cm -1 M -1) | 量子產(chǎn)率 |
219138-02-0 | 821.75 | 376 | 482 | 17000 1 | 0.53 1 |
Z-IETD-AFC是包含乙酰基(Ac)部分的熒光半胱天冬酶8 /粒酶B底物。該底物被胱天蛋白酶8水解以產(chǎn)生高熒光的7-酰胺基-4-三氟甲基香dou素(AFC)。
重要的是要存放在<-15°C的環(huán)境中,并應(yīng)存放在陰涼處。
自收到之日起12個(gè)月內(nèi)可以使用。
程序
以下協(xié)議僅提供指導(dǎo),應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。
使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常規(guī)解決方案胱天蛋白酶測(cè)定
- 在DMSO中準(zhǔn)備10 mM的儲(chǔ)備溶液。
- 如下準(zhǔn)備2X半胱天冬酶底物(50 µM)分析溶液:50 µL底物原液,100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。
- 將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X半胱天冬酶底物測(cè)定溶液混合,并在室溫下孵育至少1小時(shí)。
- 使用熒光酶標(biāo)儀讀取熒光,或使用酶標(biāo)儀讀取吸光度。
使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針的細(xì)胞Caspase測(cè)定
- 在DMSO中準(zhǔn)備2-5 mM的儲(chǔ)備溶液。
- 根據(jù)需要處理細(xì)胞。
- 通過(guò)用20 mM Hepes緩沖液(HHBS)在Hanks中稀釋DMSO儲(chǔ)備溶液(來(lái)自步驟2.1),制備2X滲透性半胱天冬酶底物(20 µM)分析溶液。
- 將等體積的處理過(guò)的細(xì)胞與2X半胱天冬酶底物測(cè)定溶液混合(來(lái)自步驟2.3),并在37°C,5%CO 2的 培養(yǎng)箱中孵育細(xì)胞至少1小時(shí)。
- 用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。
- 通過(guò)流式細(xì)胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。
使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針進(jìn)行細(xì)胞半胱天冬酶測(cè)定 (僅適用于#13470-13476)
- 通過(guò)向小瓶中加入50 µL DMSO制備250X儲(chǔ)備液。
- 根據(jù)需要處理細(xì)胞。
- 以1:250的比例將250 X DMSO儲(chǔ)備溶液添加到細(xì)胞溶液中(例如2 µL至500 µL細(xì)胞),并將細(xì)胞在37°C,5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時(shí)。
- 用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。
- 通過(guò)流式細(xì)胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。
13426 Caspase 9熒光底物Ac-LEHD-AMC 藍(lán) Ac-LEHD-AMC 5 mg 13427 Caspase 9熒光底物(Ac-LEHD)2-R110 綠 (Ac-LEHD)2-R110 1 mg