需要danguchun來(lái)建立和維持細(xì)胞膜。它在生理溫度范圍內(nèi)調(diào)節(jié)膜的流動(dòng)性。  danguchun也是合成weishengsuD和類(lèi)固醇激素（包括腎上腺激素pizhichun和醛固酮以及性激素，雌激素及其衍生物）的重要前體分子。該Amplite™danguchun定量分析試劑盒提供了zui靈敏的danguchun定量方法之一。該試劑盒使用Amplite™Red定量danguchun的濃度，這與danguchun存在時(shí)danguchun氧化酶介導(dǎo)的酶偶聯(lián)反應(yīng)中過(guò)氧化氫的產(chǎn)生有關(guān)。danguchun的量與在酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)中形成的過(guò)氧化氫的濃度成比例。在存在過(guò)氧化物酶的情況下，Amplite™Red的熒光強(qiáng)度與過(guò)氧化氫的濃度成比例，而過(guò)氧化氫的濃度則轉(zhuǎn)換為danguchun的濃度。該測(cè)定可以容易地用熒光酶標(biāo)儀讀取。

1. 準(zhǔn)備danguchun測(cè)定工作溶液（50 µL）

2. 添加danguchun標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50 µL）

3. 在37°C孵育30分鐘

4. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm時(shí)的熒光強(qiáng)度

重要      開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊性噭┖薪M件。

庫(kù)存解決方案的準(zhǔn)備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X）

在Amplite™Red底物（組分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（組分E）。儲(chǔ)備溶液應(yīng)及時(shí)使用。應(yīng)將所有剩余的溶液等分，并在-20 ^o C      重新冷凍。
注意避免重復(fù)凍融循環(huán)。
注意      在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT））存在下，Amplite™Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT的終濃度應(yīng)不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7-8下進(jìn)行。建議使用提供的測(cè)定緩沖液（pH 7.4）。

2danguchun標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（20 µM）

將10 µLdanguchun標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）添加到990 µL測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

danguchun標(biāo)準(zhǔn)

準(zhǔn)備danguchun標(biāo)準(zhǔn)液（20 µM）。然后在測(cè)定緩沖液（組分B）中進(jìn)行1：3系列稀釋?zhuān)缘玫酱蠹s10、3、1、0.3、0.1、0.03和0.01 µM系列稀釋的danguchun標(biāo)準(zhǔn)品。包括非danguchun緩沖液對(duì)照作為空白對(duì)照。

準(zhǔn)備工作解決方案

danguchun測(cè)定工作溶液

將5 mL測(cè)定緩沖液（組分B）添加到danguchun酶混合物（組分C）的瓶中，并充分混合。將20 µL的Amplite Red™儲(chǔ)備溶液（250X）加入danguchun酶混合瓶中。