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鈣通量測(cè)定法是在藥物開(kāi)發(fā)中篩選G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）的方法。Screen Quest™Calbryte-590™無(wú)探針和免洗的鈣含量測(cè)定試劑盒提供了zui穩(wěn)定的基于均相紅色熒光的測(cè)定，可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣的動(dòng)員。表達(dá)感興趣的GPCR（通過(guò)鈣信號(hào)）的細(xì)胞預(yù)先裝有我們專(zhuān)有的Calbryte-590 AM，可以穿過(guò)細(xì)胞膜。Calbryte-590 AM是用于HTS篩選的zui亮的鈣指示劑。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，Calbryte-590 AM的親脂性封閉基團(tuán)就會(huì)被非特異性細(xì)胞酯酶裂解，產(chǎn)生帶負(fù)電荷的熒光染料，并留在細(xì)胞內(nèi)部，與鈣結(jié)合后其熒光會(huì)大大增強(qiáng)。當(dāng)細(xì)胞被篩選化合物刺激時(shí)，受體信號(hào)釋放細(xì)胞內(nèi)鈣，大大增加了Calbryte-590 AM的熒光。Calbryte-590 AM具有出色的細(xì)胞滯留性，高靈敏度以及熒光增加100-250倍（當(dāng)與鈣形成復(fù)合物時(shí)）的特性，使其成為測(cè)量細(xì)胞鈣的理想指標(biāo)。Calbryte-590 AM是不需要binghuangshu以改善細(xì)胞保留能力的紅色鈣染料。Screen Quest™Calbryte-590™無(wú)探針和免洗的鈣測(cè)定試劑盒提供了*化的測(cè)定方法，用于監(jiān)測(cè)GPCR和脆弱或困難細(xì)胞系的鈣通道。與基于綠色熒光的鈣測(cè)定相比，該測(cè)定試劑盒對(duì)化合物庫(kù)中有色化合物的干擾較小。它還與用于高含量分析的GFP細(xì)胞系兼容。該測(cè)定可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并易于適應(yīng)自動(dòng)化。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 儀器規(guī)格 | 底部讀取模式/可編程液體處理 |
| 其他 | |
| FDSS，ViewLux，NOVOStar，ArrayScan，F(xiàn)lexStation，IN細(xì)胞分析儀 |
組件
| 組件A：Calbryte™590上午 | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：10倍Pluronic®F127 Plus | 1瓶（1毫升） |
| 成分C：HHBS（具有20 mM Hepes的漢克斯緩沖區(qū)） | 1瓶（9毫升） |
在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中準(zhǔn)備細(xì)胞
添加Calbryte™590 AM染料加載溶液（對(duì)于96孔板為100 µL /孔，對(duì)于384孔板為25 µL /孔）
在室溫或37°C下孵育45-60分鐘
在Ex / Em = 540/590 nm處監(jiān)控?zé)晒?/p>
重要說(shuō)明
使用前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊刑准M件。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Calbryte™590 AM儲(chǔ)備溶液：
將20 µL（目錄號(hào)36200）或200 µL（目錄號(hào)36201和＃36202）的DMSO加入小瓶Calbryte™590 AM（組分A）中并充分混合。注意：20 µL Calbryte™590 AM儲(chǔ)備溶液足以裝一板。如果未密封的Calbryte™590 AM儲(chǔ)備溶液可以將試管等分，則可在< -20 o C的溫度下等分一個(gè)月，然后保存 超過(guò)一個(gè)月。注意：避光，并避免重復(fù)的凍融循環(huán)。
2.測(cè)定緩沖液（1×）：
HHBS的混合9毫升（成分C，不包括在試劑盒 目錄號(hào)36202。 ）被1個(gè)10X毫升的Pluronic ® F127加（10X）（成分B）和它們混合均勻。
準(zhǔn)備工作溶液
Calbryte™590 AM染料加載溶液：
將20 µL Calbryte™590 AM儲(chǔ)備溶液添加到10 mL的測(cè)定緩沖液（1X）中，并充分混合。 注意： 該工作溶液在室溫下至少可穩(wěn)定2小時(shí)。 注意： 10 mL染料加載溶液足以用于一塊96孔板。
程序
將100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Calbryte™590 AM染料加載溶液添加到細(xì)胞板中。
在細(xì)胞培養(yǎng)箱中將染料加載板孵育60分鐘，然后在室溫下將板再孵育15-30分鐘。 注意： 如果測(cè)定需要37°C，請(qǐng)立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而無(wú)需進(jìn)一步室溫孵育。如果細(xì)胞在室溫下能長(zhǎng)時(shí)間正常工作，則在室溫下孵育細(xì)胞板1小時(shí)（建議孵育時(shí)間不超過(guò)2小時(shí)）。
用HHBS或所需的緩沖液準(zhǔn)備復(fù)合板。
通過(guò)監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm的熒光強(qiáng)度運(yùn)行鈣通量測(cè)定法。
36201 Screen Quest™ Calbryte 590™免bbinghuangshu和免洗鈣檢測(cè)試劑盒 Screen Quest™ Calbryte-590™ Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit 10 Plates 36202 Screen Quest™ Calbryte 590™免bbinghuangshu和免洗鈣檢測(cè)試劑盒 Screen Quest™ Calbryte-590™ Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit 100 Plates 36300 Screen Quest™10X細(xì)胞染色緩沖液 *含酚紅* Screen Quest™ 10X cell staining buffer with Phenol Red Plus™ 10 Plates 36301 Screen Quest™10X鈣離子檢測(cè)緩沖液 *含酚紅* Screen Quest™ 10X calcium assay buffer with Phenol Red Plus™ 10 Plates 36305 Screen Quest™發(fā)光法鈣離子檢測(cè)試劑盒 Screen Quest™ Luminometric Calcium Assay Kit 10 Plates 36306 Screen Quest™發(fā)光法鈣離子檢測(cè)試劑盒 Screen Quest™ Luminometric Calcium Assay Kit *10X10 Plates* 100 Plates
