大多數(shù)商業(yè)化的蛋白激酶檢測(cè)試劑盒都是基于對(duì)磷酸肽形成或ATP缺失的監(jiān)測(cè)。對(duì)于基于磷酸肽檢測(cè)的激酶測(cè)定試劑盒，人們不得不花費(fèi)時(shí)間和精力來(lái)鑒定優(yōu)化的肽底物，而ATP消耗方法由于使用了受多種生物化合物抑制或激活的熒光素酶而遭受了各種干擾。Amplite™通用激酶測(cè)定試劑盒基于對(duì)ADP形成的監(jiān)測(cè)，該形成與酶磷酸轉(zhuǎn)移酶活性成正比，并進(jìn)行熒光測(cè)定。該試劑盒提供了一種快速，簡(jiǎn)單且均一的測(cè)定激酶活性的測(cè)定方法。高靈敏度（<0.2 uM ADP），寬泛的ATP耐受性（1-300 uM），非抗體，非放射性和免清洗方法可檢測(cè)由于酶活性而產(chǎn)生的ADP量，使其成為測(cè)定激酶Michaelis-Menten動(dòng)力學(xué)以及篩選和鑒定激酶抑制劑的理想試劑盒。可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行測(cè)定，無(wú)需任何分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。

1. 運(yùn)行激酶反應(yīng)（20 µL）
2. 添加ADP傳感器緩沖液（20 µL）
3. 添加ADP傳感器工作溶液（10 µL）
4. 在室溫下孵育15分鐘-1小時(shí)
5. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570nm）的熒光強(qiáng)度

重要說(shuō)明
使用前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊辛N成分。強(qiáng)烈建議使用黑色印版以獲得*效果。ADP分析應(yīng)在6.5至7.4的pH下進(jìn)行。避免將ADP傳感器I（組件B1）直接暴露在光下。避免來(lái)自外來(lái)生物源的潛在ADP污染。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. ADP傳感器I儲(chǔ)備溶液（50X）：
將50 µL DMSO（組分B3）添加到ADP傳感器1（組分B1）的小瓶中，制成50X ADP傳感器I儲(chǔ)備溶液。

2. ADP標(biāo)準(zhǔn)溶液（300 mM）：
將100 µL ddH ₂ O加入ADP標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）中，制成300 mM ADP標(biāo)準(zhǔn)溶液。