抗HA-標(biāo)簽小鼠單克隆抗體（瓊脂糖結(jié)合）

數(shù)據(jù)表

說明收起

抗HA標(biāo)簽小鼠單克隆抗體（瓊脂糖結(jié)合）是一種單克隆抗HA

與瓊脂糖共價連接的抗體；瓊脂糖可實現(xiàn)  HA標(biāo)記蛋白的免疫沉淀（IP）或它們相互作用的伴侶的共免疫沉淀（Co-  IP）。

來源收起

該Abmart單克隆抗體是通過用包含流感血凝素表位（YPYDVPDYA）（KLH偶聯(lián)）的合成肽 免疫動物而產(chǎn)生的  。

特異性收起

抗HA標(biāo)簽小鼠mAb可檢測到包含HA 表位標(biāo)簽的轉(zhuǎn)染蛋白  。

倉儲收起

產(chǎn)品以50％漿液的形式在存儲緩沖液（1 PBS，pH 7.4，  含0.1％NaN）中提供。將產(chǎn)品存放在4°C且不要凍結(jié)。

反應(yīng)性收起

所有

同種型收起

• 世界銀行

• 

  HEK 293T細胞是否用HA標(biāo)記的蛋白轉(zhuǎn)染，將100μl細胞裂解液（約100μg總蛋白）與30μl50％的抗HA瓊脂糖漿在4°C孵育3小時。洗滌后，將小珠用30μl洗脫緩沖液洗脫兩次。中和洗脫液后，加入6μl6×SDS上樣緩沖液。然后將20μl樣品進行SDS-PAGE.Anti-HA-Tag Mouse mAb探測印跡。
  泳道1：1次用洗脫緩沖液洗脫。
  泳道2：未轉(zhuǎn)染的HEK 293T裂解物的IP。

推薦的洗脫緩沖液收起

0.2 Mganansuan，pH 2.2

免疫沉淀程序收起

可以在1.5 ml微量離心管或離心柱中進行這項工作。

1.翻轉(zhuǎn)試管或小瓶幾次，*重懸抗HA瓊脂糖  。

2.使用寬口移液器吸頭將20-50μl50％的抗HA瓊脂糖漿添加到細胞裂解物中  。

注意： 裂解物應(yīng)該是新鮮的，并且對于表達良好的標(biāo)記蛋白，200μl裂解物（200-500μg總蛋白）通常會產(chǎn)生良好的IP結(jié)果。

3.在溫和攪拌下孵育2小時至4過夜。

4.用1 ml TBS緩沖液或裂解緩沖液（如RIPA（50 mM Tris HCl，pH 7.4，150 mM NaCl，1 mM EDTA，1％NP- 40，0.5 ％脫氧膽酸鈉  ））洗滌珠  ，離心3分鐘2,000克，棄去上清液。 洗滌3次，避免在洗滌過程中丟失珠子。

5.洗脫HA標(biāo)記的蛋白。

選項1.用洗脫緩沖液洗脫。

向珠中添加30-50μl洗脫緩沖液，輕輕敲打試管以充分混合，  立即  離心3分鐘，非常小心地將上清液轉(zhuǎn)移至  新管中（避免轉(zhuǎn)移任何珠）。

注意：  每20μl洗脫緩沖液中加入1 l 1.5 M Tris，pH 9.0，立即中和洗脫液。

選項2.用HA肽洗脫

添加30-50 μ 升 HA肽溶液（100 μ微克/毫升HA肽的TBS緩沖液），  輕輕拍打管拌勻，孵育10分鐘，離心3分鐘，  并且上清液轉(zhuǎn)移到新的管中。TBS緩沖液：50 mM Tris HCl，  150 mM NaCl，pH 7.4。

選項3.用SDS加載緩沖液洗脫

加入30μl2 SDS上樣緩沖液，輕輕敲打試管以使其充分混合，在100 °C下 煮沸  5分鐘，離心3分鐘，然后將上清液轉(zhuǎn)移至新的  試管中。

注意： 在這種情況下，上清液不僅包含結(jié)合蛋白，而且還包含IgG（重鏈和輕鏈）。

6.準(zhǔn)備用于蛋白質(zhì)印跡的SDS-PAGE凝膠或進行其他測定。

配套產(chǎn)品收起

＃M20001 His-Tag（2A8）小鼠單克隆抗體

＃M20002 Myc-Tag（19C2）小鼠單克隆抗體

＃M20003 HA-Tag（26D11）鼠標(biāo)單克隆抗體

＃M20004 GFP標(biāo)簽（7G9）小鼠單克隆抗體

＃M20007 GST-Tag（12G8）鼠標(biāo)單克隆抗體

＃M20008 DYDDDDDK-Tag（3B9）小鼠單克隆抗體（與同一表位綁定

Sigma的抗FLAG M2抗體）

＃M20012抗Myc標(biāo)簽小鼠單克隆抗體（瓊脂糖結(jié)合）

＃M20018抗DYKDDDDK標(biāo)簽小鼠單克隆抗體（瓊脂糖偶聯(lián)）（綁定到

與Sigma的Anti-FLAG M2抗體相同的表位）