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南京沃博生物科技有限公司

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DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(膠體金試紙條型)

參   考   價(jià): ¥ 3300

訂  貨  量: ≥1盒

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào):WLN8203KIT

品       牌:

廠商性質(zhì):生產(chǎn)商

所  在  地:南京市

更新時(shí)間:2022-02-16 09:38:51瀏覽次數(shù):1092

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反應(yīng)溫度為39 ℃,反應(yīng)時(shí)長10 mins,即可使用膠體金試紙條進(jìn)行檢測,快速、簡便,適用于現(xiàn)場檢測。

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(膠體金試紙條型)使用說明書

(貨號(hào):WLN8203KIT

原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下,侵入雙鏈DNA模板;在侵入位點(diǎn)形成D-loop區(qū)域,并開始對DNA雙鏈進(jìn)行掃描;待找到與引物互補(bǔ)的目的區(qū)域后,復(fù)合體Rec/ssDNA解體的同時(shí),聚合酶也結(jié)合到引物的3’末端,開始鏈的延伸。依賴nfo酶的作用,加入根據(jù)模版設(shè)計(jì)的特異的分子探針,使用膠體金技術(shù)(三明治夾心法)可以對zui終結(jié)果進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品特點(diǎn):

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短(僅需12 mins等優(yōu)點(diǎn),反應(yīng)組分為干粉狀態(tài),操作簡便,易于保存。

本試劑對設(shè)備要求低,金屬浴水浴鍋等即可進(jìn)行反應(yīng)操作,無需購買PCR擴(kuò)增儀等價(jià)格高昂的專屬設(shè)備

引物設(shè)計(jì):

建議使用長度在 30-35 bp的引物,引物過短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測靈敏度;下游引物的5’端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán)(常用shengwusu)。引物設(shè)計(jì)避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增;擴(kuò)增子長度建議在150-300 bp,通常不超過500 bp。

熒光探針設(shè)計(jì):

在上下游引物中間,設(shè)計(jì)一段長度為46-52nt與目的片段互補(bǔ)的序列;5’端修飾一個(gè)抗原標(biāo)記(典型FAM); 在5’端和3’末端的中部位置標(biāo)記一個(gè)dSpacer(si氫呋喃,THF),作為nfo的識(shí)別位點(diǎn);3’末端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán),例如胺基、磷酸基團(tuán)或C3-Spacer等。

試劑盒組成:

組成

含量

A buffer

1.6 mL×1管

B buffer

150 μL×1管

試劑

48份

使用說明書

1份

試劑盒儲(chǔ)存:

運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸;

儲(chǔ)存條件:儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重壓、反復(fù)凍融;

產(chǎn)品有效期:12個(gè)月。


操作步驟:提前30分鐘將試劑盒所需組分取出,室溫融化,震蕩混勻。

1) 每個(gè)干粉反應(yīng)管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需*融化混勻,否則會(huì)對實(shí)驗(yàn)效果產(chǎn)生影響);

2) 每個(gè)反應(yīng)管分別加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針(引物和探針濃度為10 μM,對于多個(gè)反應(yīng)、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應(yīng)管中);

3) 向反應(yīng)管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根據(jù)核酸濃度調(diào)整加入的核酸模板體積,并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積,至模板與ddH2O總體積為13.5 μL);

4) zui后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(對于多個(gè)反應(yīng),建議將B buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè),上下顛倒反應(yīng)管8-10次混勻);

5) 混勻后,將反應(yīng)液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應(yīng)管放入恒溫設(shè)備中37-39 oC孵育8-12 mins;

6) 反應(yīng)結(jié)束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的離心管中,混合均勻后,將膠體金試紙條的樣品端插入離心管中平衡,5 mins內(nèi)觀察質(zhì)控線與檢測線判讀結(jié)果。

體系配制

組分

體積(μL)

A buffer

29.4

上游引物(10 μM)

2

下游引物(10 μM)

2

探針(10 μM)

0.6

ddH2O和核酸模板

13.5

B buffer

2.5

總體積

50

注意事項(xiàng):

1. 由于試劑盒靈敏度非常高,在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請注意避免微量核酸污染,并盡量考慮設(shè)置空白對照以確認(rèn)是否有核酸污染。

2. 試劑盒保質(zhì)期12個(gè)月。每次使用時(shí),請取出實(shí)驗(yàn)所需的MIRA反應(yīng)單元的數(shù)量,置于冰浴條件下并在8小時(shí)內(nèi)使用;剩余部分,請置于存儲(chǔ)條件下。

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(基礎(chǔ)型)WLB8201KIT48份/盒3300
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(熒光型)WLE8202KIT48份/盒3300
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(膠體金試紙條型)WLN8203KIT48份/盒3300
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(膠體金試紙條型)WLRN8206KIT48份/盒3360
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(基礎(chǔ)型)WLRB8204KIT48份/盒3360
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(熒光型)WLRE8205KIT48份/盒3360
HybriDetect試紙條WLFS820150條/包1500


FS DNA 文庫制備試劑盒

NEBNext Ultra II DNA 文庫制

DNA PCR-free 文庫

使用 NEBNext Ultra II DNA P

NEBNext® U

使用 NEBNext Ultra II DNA P

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