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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價 | ￥ 526 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號
- 品牌
- 廠商性質 生產商
- 所在地 上海市
更新時間：2019-07-24 14:24:46瀏覽次數：374
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細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒產品簡介：
1. 在研究細胞時常要研究細胞的不同組份，而研究多的兩個細胞組份就是細胞核和細胞漿。
分離細胞核蛋白和細胞漿蛋白，不僅可以用于研究蛋白在細胞內的定位，而且很多時候分離
出來的核蛋白可以用于轉錄調控方面的研究，例如EMSA(也稱gelshift)，footprinting等。
2. Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)
提供了一種比較簡單、方便的從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中抽提細胞核蛋白與細胞漿蛋白的方
法。約90分鐘就可以完成培養(yǎng)細胞的細胞核蛋白與細胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以
用于Western，EMSA，footprinting，報告基因檢測以及酶活力測定等后續(xù)操作。
3. 是通過細胞漿蛋白抽提試劑A和B，在低滲透壓條件下，使細胞充分膨脹，然后破壞
細胞膜，釋放出細胞漿蛋白，然后通過離心得到細胞核沉淀。后通過高鹽的細胞核蛋白抽
細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒使用說明：
1. 準備溶液：溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當量的細胞漿蛋白
抽提試劑A備用，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。取適當量的細胞核
蛋白抽提試劑備用，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細胞：用PBS洗一遍，用細胞刮子刮下細胞，或用EDTA溶液處理細胞使細胞不再貼壁很
緊，并用移液器吹打下細胞。離心收集細胞，盡大努力吸盡上清，留下細胞沉淀備用。盡量避免
用胰酶消化細胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 對于懸浮細胞：用PBS洗一遍，離心收集細胞，盡大努力吸盡上清，留下細胞沉淀備用。
4. 每20微升細胞沉淀加入200微升添加了PMSF的細胞漿蛋白抽提試劑A。(對于二百萬Hela細胞，其
細胞沉淀的體積大約為20微升或40毫克。)
5. 速劇烈Vortex 5秒，把細胞沉淀*懸浮并分散開。(如果細胞沉淀沒有*懸浮并分散開，可
以適當延長vortex時間。)
6. 冰浴10-15分鐘。
7. 加入細胞漿蛋白抽提試劑B 10微升。速劇烈Vortex 5秒，冰浴1分鐘。
8. 速劇烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g離心5分鐘。
9. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為抽提得到的細胞漿蛋白?？梢粤⒓词褂茫部梢詢龃?。(千
萬不要觸及沉淀，可以在沉淀上方保留極小體積的上清，以免觸及沉淀。)
10. 對于沉淀，*吸盡殘余的上清，加入50微升添加了PMSF的細胞核蛋白抽提試劑。(不吸盡上清
會帶來細胞漿蛋白的污染。)
11. 速劇烈Vortex 15-30秒，把細胞沉淀*懸浮并分散開。然后放回冰浴中，每隔1-2分鐘再高
速劇烈Vortex 15-30秒，共30分鐘。
12. 4℃ 12,000-16,000g離心10分鐘。
13. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為抽提得到的細胞核蛋白?？梢粤⒓词褂?，也可以-80℃凍
存。
14. 對于新鮮組織：
A. 把組織盡可能切成非常細小的碎片。按照20:1的比例混合適當量的細胞漿蛋白抽提試劑A和B(例如
200微升細胞漿蛋白抽提試劑A中加入10微升抽提試劑B)。并加入PMSF至終濃度為1mM配制成
組織勻漿液。按照每60mg組織加入200微升組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液，并在玻璃
勻漿器內充分勻漿。勻漿需在冰浴或4℃進行。
B. 勻漿后把勻漿液轉移到塑料離心管內，冰浴放置15分鐘。
C. 4℃ 1,500g離心5分鐘。把上清轉移至一預冷的塑料管中，為抽提得到的部分細胞漿蛋白。(吸上
清時千萬不要觸及沉淀。)
D. 對于沉淀，到了這一步已經充分勻漿，但很多細胞還沒有破碎。
