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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價格,耐藥細(xì)胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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- 聯(lián)系人：
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- www.yajimall.com
| 參考價 | ￥ 3280 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 上海市
更新時間：2019-05-31 10:12:11瀏覽次數(shù)：156
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組織來源：乳腺組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡介：
人乳腺上皮原代細(xì)胞分離自乳腺組織；乳腺是復(fù)管泡狀皮膚腺，主要由腺上皮細(xì)胞組成，并具有特殊的泌乳功能。在期，導(dǎo)管末梢發(fā)育成腺泡；近年來的許多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細(xì)胞（MEC）有密切，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開展的關(guān)鍵步驟。乳腺是乳房的腺體組織，乳腺由導(dǎo)管和腺泡組成，腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常發(fā)育是由體內(nèi)激素和局部合成的生長因子共同調(diào)控，其中乳腺表達(dá)的生長因子對乳腺上皮細(xì)胞的增殖、分化、凋亡產(chǎn)生極大的影響。乳腺上皮細(xì)胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織，為貼壁生長型細(xì)胞，呈多角形、圓形以及短梭形；乳腺上皮細(xì)胞主要功能即生乳功能。
本公司生產(chǎn)的乳腺上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
M199、FBS、上皮細(xì)胞生長添加劑、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用Procell人乳腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：CM-H017）作為體外培養(yǎng)人乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)基。
人乳腺上皮原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中，傳代是非常重要的環(huán)節(jié)，若操作不當(dāng)會給細(xì)胞帶來不可逆轉(zhuǎn)的傷害，原代細(xì)胞因其培養(yǎng)難度高且傳代次數(shù)有限，細(xì)胞消化的步驟需要格外細(xì)心與謹(jǐn)慎。生物根據(jù)其豐富的原代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗，總結(jié)出一套細(xì)胞消化的方法，有效降低了消化步驟對細(xì)胞的操作。現(xiàn)分享給大家：
1. 當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80-90%融合時需要傳代培養(yǎng)。
2. 提前準(zhǔn)備好多聚賴氨酸（PLL，貨號KL0403）或纖維粘連蛋白（BPF，貨號KL8248）包被好的培養(yǎng)瓶。
3. 將*培養(yǎng)基，胰酶/EDTA消化液（T/E，貨號KL0103），胰胰中和液（TNS，貨號KL0113）和不含鈣鎂離子的DPBS（貨號KL0303）加熱至室溫。我們不推薦用37度水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。
4. 用DPBS沖洗細(xì)胞。
5. 以T-75培養(yǎng)瓶為例，向培養(yǎng)瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。輕輕搖動培養(yǎng)瓶保證細(xì)胞被胰酶/EDTA消化液*覆蓋。將培養(yǎng)瓶置于37度培養(yǎng)箱1-2分鐘直到細(xì)胞變圓。在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
6. 在消化期間，準(zhǔn)備一支50ml離心管加入5ml胎牛血清（FBS，貨號KL0500）。
7. 將胰酶/EDTA消化液從培養(yǎng)瓶中吸出至50ml離心管中（一小部分細(xì)胞已消化下來），將培養(yǎng)瓶繼續(xù)置于37度培養(yǎng)箱中1-2分鐘（此時培養(yǎng)瓶中沒有液體）。
8. 在孵化結(jié)束時，輕輕拍打培養(yǎng)瓶側(cè)面使細(xì)胞脫離表面。在顯微鏡下檢查以確保所有細(xì)胞已脫離。
9. 向培養(yǎng)瓶中加入5ml胰酶中和液，將消化后的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至50ml離心管中。再加入5ml胰酶中和液沖洗培養(yǎng)瓶，以保證所有細(xì)胞被收集。
10. 在顯微鏡下觀察剩余細(xì)胞數(shù)量以確定是否收集成功，細(xì)胞數(shù)量應(yīng)小于5%。
11. 以1000轉(zhuǎn)/分離心收取的細(xì)胞懸液5分鐘，然后在培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞。
12. 細(xì)胞計數(shù)，然后將細(xì)胞以推薦的細(xì)胞密度接種在包被好的培養(yǎng)瓶中。
