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公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細(xì)胞計數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒 PAP(Mouse plasmin-antiplasmin complex)  小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物 96T

nonstructural protein 1： A型流感病毒-NS1抗體 BRL 3A細(xì)胞，大鼠肝細(xì)胞 人轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)胞,AsPc-1細(xì)胞 CM-R109大鼠腦成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

C6 Others Human 人 C6 / compleme compone 6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA 試劑盒 SDF-1a/CXCL12  大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a 96T

NET1： 去甲轉(zhuǎn)運蛋白/神經(jīng)遞質(zhì)去甲轉(zhuǎn)運體抗體 人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞HPMEC

Hela-Luc (穩(wěn)定株)人細(xì)胞 Hela-Luc (stable sain) in human cervical cancer cells DMEM+10% FBS+200ug/ml Zeocin 大鼠熱休克蛋白47(HSP47)ELISA試劑盒 GMP-140  大鼠血漿α顆粒膜蛋白 96T

phospho-ITGB3(Tyr785)： 0酸化整合素β3抗體 敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21

PA317細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝的NIH3T3細(xì)胞 A10(大鼠主動脈血管平滑肌細(xì)胞) 小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Sp2/0-Ag14 人6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA 試劑盒 Connexin-45(CX45) 間隙連接蛋白45(抗原) 0.5mg

phospho-IGF1R (Tyr980)： 0酸化1受體抗體 CD48 Others Mouse 小鼠 CD48 / BCM1 / SLAMF2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人臍動脈平滑肌細(xì)胞總RNAHUASMC NA 人6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA 試劑盒 Anti-Collagen II II 型膠原(抗原) 0.5mg

phospho-IGF1R (Tyr1280)： 0酸化1受體抗體 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞;RPMI-8226 [RPMI8826]

MLE-12小鼠肺上皮細(xì)胞SF9, 昆蟲卵巢細(xì)胞 大鼠白介素10受體β(IL10Rβ)ELISA試劑盒 NSE(Human Neuron-specific enolase)  人神經(jīng)特異性烯醇化酶 96T

RAGEF2： RAGEF2蛋白抗體 DNASE1 Others Human 人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

COS-1 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞 大鼠白介素10受體α(IL10Rα)ELISA試劑盒 CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme)  人肌酸激酶同工酶MB 96T

RAB23： G蛋白偶聯(lián)受體RAB23抗體 Mv1Lu細(xì)胞，貂肺上皮細(xì)胞 人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞,HEL細(xì)胞 人皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4

NRXN3 Others Human 人 NRXN3 / Neurexin-3-beta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 PAP(Human Prostatic Acid Phosphatase)  人前列腺酸性0酸酶 96T