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上海博湖生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒 |
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更新時間：2024-11-23 09:01:26瀏覽次數(shù)：515
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C43(DE3) 電感受態(tài)細胞50ul*50以下是的訂購信息儲存條件：-70℃凍存
操作方法:
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，*次使用前做預實驗確定所加質粒的量），用手管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
C43(DE3) 電感受態(tài)細胞50ul*503. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數(shù)量級。
C43(DE3) 電感受態(tài)細胞50ul*502. 混入質粒時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量。
4. 濃度不應高于25 μg/ml，過高的濃度不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態(tài)計算轉化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif則轉化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失，但Ti質粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉基因操作，所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮這些抗生素，Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)。
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小鼠基質金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試劑盒 :英文名稱; matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質量，靈敏性的認可，您可放心，且我司有專門的售后部門對您進行全線跟蹤。
