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導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的常見原因
2021-9-24 閱讀(2685)
導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的常見原因：
一、培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長(zhǎng)所需的某種因子，出現(xiàn)這種情況一般都是小伙伴們購(gòu)買細(xì)胞后沒(méi)有按照ATCC或國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫(kù)的方法配制培養(yǎng)基，就使用實(shí)驗(yàn)室?guī)熜謳熃阌玫呐囵B(yǎng)基去養(yǎng)細(xì)胞。處理方法一般來(lái)說(shuō)就是按照方法配制培養(yǎng)基，或是直接購(gòu)買所養(yǎng)細(xì)胞專用的培養(yǎng)基。
二、細(xì)菌、支原體、真菌等污染：雖然現(xiàn)在培養(yǎng)基里面一般都會(huì)添加雙抗(和)，但是如果無(wú)菌操作觀念不強(qiáng)，依然很有可能導(dǎo)致污染。處理方法：如果有凍存的細(xì)胞，就可以把污染的細(xì)胞丟棄處理，當(dāng)然，丟棄不是隨意扔進(jìn)垃圾桶就可以了，要按照實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)范操作進(jìn)行。然后重新復(fù)蘇培養(yǎng)，建議把培養(yǎng)箱進(jìn)行全面的消毒處理。若是沒(méi)有凍存，而這種細(xì)胞又是很珍貴的，常見的處理方法就是藥物處理：細(xì)菌污染加5-10倍的抗生素；真菌污染就加抗真菌藥物；支原體污染就加抗支原體藥物，具體藥物可以咨詢相關(guān)公司的技術(shù)支持，他們會(huì)比較專業(yè)。
三、很多細(xì)胞的生長(zhǎng)存在密度依賴性，如果傳代后，細(xì)胞的密度太小，也是會(huì)影響到細(xì)胞生長(zhǎng)的。這個(gè)時(shí)候沒(méi)什么特別好的處理辦法，只得勤換液。如果細(xì)胞培養(yǎng)瓶使用的是T75倒可以消化、離心、重懸，然后接種到T25的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
四、凍存細(xì)胞DMSO(二甲基亞砜)加的量不正確，沒(méi)有逐步梯度降溫。下次復(fù)蘇后的細(xì)胞總是長(zhǎng)不好。處理方法：按照的凍存方式配制凍存液。有的細(xì)胞適合10%的DMSO，有的細(xì)胞適合5%；嚴(yán)格遵守逐步梯度降溫原則，細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)快速解凍。
五、換液間隔時(shí)間太長(zhǎng)，有的小伙伴養(yǎng)細(xì)胞真的很“佛系”，想起了就去換個(gè)液，信奉一句話“你已經(jīng)是成熟的細(xì)胞了，應(yīng)該學(xué)著自己覓食，成長(zhǎng)”。這種情況下細(xì)胞培養(yǎng)瓶中就會(huì)積累很多細(xì)胞代謝廢物，影響細(xì)胞活性。建議：勤換液
六、細(xì)胞“消化”時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞造成損傷；另外中一般會(huì)添加EDTA，螯合鈣離子，影響細(xì)胞貼壁。處理方法：控制好細(xì)胞“消化”時(shí)間，盡量去除干凈和其中的EDTA.
七、PH：細(xì)胞需要在一定的PH值下生長(zhǎng)，這個(gè)道理小伙伴們都懂。但是很多時(shí)候PH都是我們忽略的，也是小編今天要強(qiáng)調(diào)的一點(diǎn)。我們使用的培養(yǎng)基可能會(huì)隨著使用時(shí)間的加長(zhǎng)而緩慢變堿哦！(當(dāng)然，也有可能會(huì)變酸，但常見的是變堿)，一般來(lái)說(shuō)，過(guò)堿的培養(yǎng)基會(huì)影響到細(xì)胞生長(zhǎng)。處理方法：簡(jiǎn)單的就是換新鮮培養(yǎng)基唄！當(dāng)然，如果有時(shí)間和有條件也可以調(diào)一調(diào)培養(yǎng)基的PH值。
