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分享細菌轉(zhuǎn)化操作步驟

2021-5-17　　閱讀(10653)

細菌轉(zhuǎn)化操作步驟：

1、事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。

2、從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管（100μl）感受態(tài)菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10min。

3、 加入5μl連接好的質(zhì)?；旌弦海―NA含量不超過100ng），輕輕震蕩后放置冰上20min。

4、 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5min。

5、 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μl LB培養(yǎng)基（不含抗菌素）輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.

6、 在超凈工作臺中取上述轉(zhuǎn)化混合液100~300μl，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養(yǎng)皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻，待其冷卻后再涂）。

7、 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。

8、 在涂好的培養(yǎng)皿上做上標記，先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后，再倒置過來放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過夜。

9、 在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫實驗報告。

10、觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。

 



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