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上海博湖生物科技有限公司
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elisa檢測系統(tǒng)穩(wěn)定應(yīng)留意以下原理
2019-3-22 閱讀(1428)
ELISA檢測系統(tǒng)可以說是現(xiàn)在使用多的檢測方法，而且技術(shù)手段很多，對于花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低，這些都起到了至關(guān)重要的作用，一定要多注意。
應(yīng)留意以下原理：因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別，所以保留抗原很重要，我做重組蛋白時(shí)，師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時(shí)因?yàn)樵囼?yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。
還有有的包被原可能不是蛋白，對于和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，親和素:先親和素先包被載體，加入化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
