通用 miRNA 克隆接頭

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更新時間：2018-06-14 13:46:44瀏覽次數(shù)：216次

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

通用 miRNA 克隆接頭5' 端腺苷化，3' 端封閉的寡核糖核苷酸可用于Bar 方法中短片段 RNA 分子的克隆（1）。RNA 連接酶可以識別“活化"的腺苷化寡核糖核苷酸，無需 ATP，即可將其 5' 端與第二條單鏈 RNA 的 3' 端 OH 共價連接。利用此 5' 端腺苷化，3' 端封閉的寡核糖核苷酸，加入 T4 RNA 連接酶 2，截短型、T4 RNA 連接酶 2，截短型 K22

詳細介紹

通用 miRNA 克隆接頭

名稱	規(guī)格	價格	手冊
通用 miRNA 克隆接頭	0.83nmol	詢價

5' 端腺苷化，3' 端封閉的寡核糖核苷酸可用于Bar 方法中短片段 RNA 分子的克隆 (1) 。RNA 連接酶可以識別“活化”的腺苷化寡核糖核苷酸，無需 ATP，即可將其 5' 端與第二條單鏈 RNA 的 3' 端 OH 共價連接。利用此 5' 端腺苷化，3' 端封閉的寡核糖核苷酸，加入 T4 RNA 連接酶 2，截短型、T4 RNA 連接酶 2，截短型 K227Q 或 T4 RNA 連接酶 1 (有/無 ATP) ，只能與核酸混合物中的目的寡核苷酸連接。本產(chǎn)品可以用于小RNA克隆、miRNA文庫構建。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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