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原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

?小鼠肝竇內(nèi)皮細胞

商品屬性：

細胞簡介：

小鼠肝竇內(nèi)皮細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝竇內(nèi)皮細胞（SEC）是肝臟內(nèi)所占比例高的非實質(zhì)細胞，位于肝竇腔與肝細胞之間，具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。SEC由于擁有一般細胞所沒有的窗孔結(jié)構(gòu)、細胞間連結(jié)松散、內(nèi)皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性，從而達到快速交換各種大小分子的目的。肝在遭到多種病原侵襲時，肝竇內(nèi)皮細胞窗孔逐漸減少或消失，內(nèi)皮下基膜形成，產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細血管的結(jié)構(gòu)，這一過程稱為肝竇毛細血管化。它由多種因素引起，其過程極復(fù)雜，在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn)，近年來受到廣泛關(guān)注。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠肝竇內(nèi)皮經(jīng)CD31、CD14免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠肝竇內(nèi)皮采用混合酶灌流消化、反復(fù)低速離心、密度梯度離心法，并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠前列腺素E1(PGE1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat maix metalloproteinase 9/ gelatinase B (MMP-9/G 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/G

Humandeoxyribonucleicproteinaibody,DNP-AbELISAKit 人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Hamstermaixmetalloproteinase9/GelatinaseB,MMP-9ELISAK倉鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒(包括抗體)10次

MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠0酸化基末端蛋白激酶(P-JNK)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠淋巴細胞因子ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠脂肪酸合酶(FASN)ELISA試劑盒 ，英文名： FASN ELISA Kit

Mouse soluble tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand (sAIL) ELISA Kit 小鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA試劑盒

MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1,IGFBP-1ELISAKit 小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白規(guī)格：48T/96T

比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitbFGF-6大鼠堿性成纖維細胞生長因子6規(guī)格：48T/96T

EPHB4重組小鼠 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽) Protein

Anti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii 0.5mgAnti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii) 環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗原

UBE2L6重組人 UBCH8 / UBE2L6 蛋白 (His 標簽) Protein

CSF1 Protein Human 重組人 / 食蟹猴 M-CSF / CSF-1 蛋白 (His 標簽)

CD99 Protein Rat 重組大鼠 CD99 蛋白 (Fc 標簽)

小鼠肝竇內(nèi)皮細胞Anti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii 0.5mgAnti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii) 環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗原

CSF1 Protein Human 重組人 / 食蟹猴 M-CSF / CSF-1 蛋白 (His 標簽)

EPHB4重組小鼠 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽) Protein

CD99 Protein Rat 重組大鼠 CD99 蛋白 (Fc 標簽)

UBE2L6重組人 UBCH8 / UBE2L6 蛋白 (His 標簽) Protein

原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。