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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

雞小腸黏膜上皮細胞

商品屬性：

細胞簡介：

雞小腸黏膜上皮分離自小腸組織；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內(nèi)，上連胃幽門，下接盲腸，分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的，因為食物經(jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運動的機械性消化后，基本上完成了消化過程，同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切；構(gòu)成腸腺的細胞有柱狀細胞、杯狀細胞、潘氏細胞和未分化細胞。柱狀細胞和內(nèi)分泌細胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運動功能，其中以吸收和分泌功能為主。平滑肌細胞的收縮是負責(zé)腸蠕動的動力，促使食物向下運動。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強度。

方法簡介：

公司實驗室分離的雞小腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的雞小腸黏膜上皮采用蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴(yán)格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認(rèn)為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA 試劑盒 96T/48T

Ai glomerular baseme membrane aibody (TBM) ELISA Kit 人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA試劑盒

Humanai-EJ-aibody，EJ/GlyRSELISAKit 人EJ抗體/抗甘氨酰NA合成酶抗體(EJ/GlyRS)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACH(Mouseacetylcholine)ELISAKit小鼠乙酰規(guī)格：48T/96T

藥品阿斯巴塘(aspaame)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

MousephosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKit小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

亞鹽快速測試盒   Niite rapid test case

氮快速測定試劑盒    niogen rapid determination kit

軟水硬度測定試劑盒   Water hardness determination kit

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大鼠花生四烯酸5脂氧合酶(Alox5)ELISA試劑盒 ，英文名： Alox5 ELISA Kit

Rabbit ai glycoprotein aibody (GP) ELISA Kit 兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒

登革熱病毒Ⅱ型(DFV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMouseeosinophilcationicprotein,ECPELISAKit小鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白規(guī)格：48T/96T

體液環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性熒光定量檢測試劑盒20次

ELISAKitCTX-Ⅰ人Ⅰ型膠原C端肽規(guī)格：48T/96T

DKK1重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, Fc 標(biāo)簽) Protein

P311 protein 增生性瘢痕相關(guān)蛋白(抗原 0.5mgP311 protein 增生性瘢痕相關(guān)蛋白(抗原)

BCHE重組人 BCHE / Butyrylcholinesterase 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CAPG Protein Human 重組人 CAPG / AFCP 蛋白

FGFR2 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR2 / CD332 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

雞小腸黏膜上皮細胞P311 protein 增生性瘢痕相關(guān)蛋白(抗原 0.5mgP311 protein 增生性瘢痕相關(guān)蛋白(抗原)

CAPG Protein Human 重組人 CAPG / AFCP 蛋白

DKK1重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, Fc 標(biāo)簽) Protein

FGFR2 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR2 / CD332 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

BCHE重組人 BCHE / Butyrylcholinesterase 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein