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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細胞的訂購信息：

英文簡稱：293 c18細胞    

產(chǎn)品名稱：胚腎細胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：

培養(yǎng)條件： DMEM-H+ 10%FBS　

傳代方法：1:4~1:10傳代；每周2次。

貨號：CS-X64009

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項：
（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞在對數(shù)生，細胞密度適合，剛剛發(fā)生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實驗報告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
血小板反應(yīng)蛋白(THBS1)檢測試劑盒英文名稱：THBS1 ELISA Kit色素CYP3A抗體包裝25g

血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)檢測試劑盒英文名稱：TM ELISA Kit色素cP450 CYP20A1抗體包裝5g

血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)檢測試劑盒英文名稱：SAA2 ELISA Kit色素cP4501B1抗體包裝1g

血清淀粉樣P物質(zhì)(SAP)檢測試劑盒英文名稱：SAP ELISA Kit色素cP450 CYP26A1抗體包裝5g

血紅素氧合酶2(HO2)檢測試劑盒英文名稱：HO2 ELISA Kit磷酸化周期素E抗體包裝100mg

血紅素氧合酶1(HO1)檢測試劑盒英文名稱：HO1 ELISA Kit磷酸化周期素E2抗體包裝5g

血紅蛋白(HB)檢測試劑盒英文名稱：HB ELISA Kit周期素M3抗體包裝1g

血管抑素(ANG)檢測試劑盒英文名稱：ANG ELISA Kit周期素Y/X抗體包裝250mg

血管性血友病因子(vWF)檢測試劑盒英文名稱：vWF ELISA Kit磷酸化周期素D3抗體包裝1g

血管細胞粘附分子1(VCAM1)檢測試劑盒英文名稱：VCAM1 ELISA Kit色素b5還原酶3抗體包裝1g

血管生成素樣蛋白7(ANGPTL7)檢測試劑盒英文名稱：ANGPTL7 ELISA KitCWC22蛋白抗體包裝250mg

血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)檢測試劑盒英文名稱：ANGPTL3 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框95抗體包裝5g

血管生成素樣蛋白2(ANGPTL2)檢測試劑盒英文名稱：ANGPTL2 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框67抗體包裝10MG

血管生成素樣蛋白1(ANGPTL1)檢測試劑盒英文名稱：ANGPTL1 ELISA Kit磷酸化酪蛋白激酶1γ1+γ2+γ3抗體包裝100ml

血管生成素4(ANGPT4)檢測試劑盒英文名稱：ANGPT4 ELISA Kit原卟啉氧化酶3抗體包裝25ml
293 c18細胞血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)檢測試劑盒英文名稱：ACE2 ELISA Kit芳香烴受體抗體包裝5g

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)檢測試劑盒英文名稱：ACE ELISA Kit吸引素抗體包裝1g

血管緊張素原(aGT)檢測試劑盒英文名稱：aGT ELISA Kit腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗體包裝5g

血管緊張素Ⅱ受體2(AT2R)檢測試劑盒英文名稱：AT2R ELISA Kit蛋白激酶B2包裝1g

血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)檢測試劑盒英文名稱：ANG-Ⅱ ELISA Kit血管生成素2抗體包裝25g

血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測試劑盒英文名稱：Ang-Ⅰ ELISA Kit芳香化酶/色素P450/雌合成酶抗體包裝5g

血管緊張素1-7(Ang1-7)檢測試劑盒英文名稱：Ang1-7 ELISA Kit腺苷A2A受體抗體包裝1g

血管活性腸肽(VIP)檢測試劑盒英文名稱：VIP ELISA Kit蛋白激酶A錨定蛋白95抗體包裝25g

溴脫氧核苷(BrdU)檢測試劑盒英文名稱：BrdU ELISA Kit頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運體蛋白抗體包裝5g

雄烯二酮(ASD)檢測試劑盒英文名稱：ASD ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶8抗體包裝10MG

雄受體(AR)檢測試劑盒英文名稱：AR ELISA Kit芳香乙酰脫乙?；笜拥鞍?抗體包裝50MG

性結(jié)合球蛋白(SHBG)檢測試劑盒英文名稱：SHBG ELISA KitACN9蛋白抗體包裝250mg

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7(Smad7)檢測試劑盒英文名稱：Smad7 ELISA Kit雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端）包裝50MG

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子1(Smad1)檢測試劑盒英文名稱：Smad1 ELISA Kit腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體包裝5g

新生狀腺素(NN-T4)檢測試劑盒英文名稱：NN-T4 ELISA Kit腺苷酸激酶抗體包裝25mg