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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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公司信息
- 聯(lián)系人：
- 李小姐
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- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號
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| 參考價 | 面議 |
- 型號 T25
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-08-23 17:07:36瀏覽次數(shù)：274
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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細胞的訂購信息：
英文簡稱：KYSE70細胞
產(chǎn)品名稱：食道鱗狀細胞癌
規(guī)格：T25
形態(tài)特性：上皮樣
生長特性：貼壁生長
特征特性：
培養(yǎng)條件：RPMI 1640 + 2mM Glutamine + 10% FBS
傳代方法：1：5傳代
貨號：CS-X64069
注意事項：
（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞在對數(shù)生，細胞密度適合，剛剛發(fā)生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實驗報告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
Toll樣受體4(TLR4)檢測試劑盒英文名稱：TLR4 ELISA Kit表面趨化因子受體1抗體包裝1g
Toll樣受體3(TLR3)檢測試劑盒英文名稱：TLR3 ELISA Kit表面趨化因子受體2抗體包裝100g
Toll樣受體2(TLR2)檢測試劑盒英文名稱：TLR2 ELISA Kit表面趨化因子受體3抗體包裝25g
Thy1細胞表面抗原(Thy1)檢測試劑盒英文名稱：Thy1 ELISA Kit表面趨化因子受體4抗體包裝500g
TGFβ誘導早期應(yīng)答基因1(TIEG1)檢測試劑盒英文名稱：TIEG1 ELISA Kit活化半胱酸蛋白酶蛋白-3抗體包裝25ml
TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子12(TAF12)檢測試劑盒英文名稱：TAF12 ELISA Kit抗Ⅵ型膠原抗體包裝5ml
SRC/FGR/YES相關(guān)FYN癌基因(FYN)檢測試劑盒英文名稱：FYN ELISA Kit半蛋白酶8抗體包裝25g
Smad同源物7(Smad7)檢測試劑盒英文名稱：Smad7 ELISA Kit信號轉(zhuǎn)導蛋白亞基8抗體包裝5g
Smad同源物3(Smad3)檢測試劑盒英文名稱：Smad3 ELISA Kit表面趨化因子受體10抗體包裝1g
Smad同源物2(Smad2)檢測試劑盒英文名稱：Smad2 ELISA Kit轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體包裝5g
Smad同源物1(Smad1)檢測試劑盒英文名稱：Smad1 ELISA Kit鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體包裝1g
Slit同源物3(Slit3)檢測試劑盒英文名稱：Slit3 ELISA Kit周期檢測點激酶1抗體包裝25g
Slit同源物2(Slit2)檢測試劑盒英文名稱：Slit2 ELISA Kit鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1抗體包裝5g
Slit同源物1(Slit1)檢測試劑盒英文名稱：Slit1 ELISA Kit尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子2/3抗體包裝1g
Sideroflexin1蛋白(SFXN1)檢測試劑盒英文名稱：SFXN1 ELISA Kit周期素H抗體包裝5g
KYSE70細胞N-乙酰氨基葡萄糖（標準品）英文名稱： NilotinibC-藻藍素/藻藍蛋白/藻青蛋白抗體包裝25g
Nateglinide（標準品）英文名稱： Spiramycin色素P450 1A1抗體包裝5g
Nifedipine（標準品）英文名稱： Spiramycin絲/蛋白質(zhì)激酶II α抗體包裝1mg
Norepinephrine Bitartrate(標...英文名稱： Spironolactone2號染色體開放閱讀框66抗體包裝5mg
Norethindrone(標準品)英文名稱： SpironolactoneCULLIN抗體包裝25mg
O,P-滴滴滴(標準品)英文名稱： Carbamazepine小牛胸腺DNA抗體包裝5mg
P-氨基苯酸異酯（標準品）英文名稱： Carbamazepine1號染色體開放閱讀框226抗體包裝25g
Phenformin hydrochloride(標準...英文名稱： Carboplatin組織蛋白酶L抗體包裝5g
e hydrochloride...英文名稱： Carboplatin絲/蛋白激酶II β抗體(casein kinase IIβ)包裝100g
Pioglitazone HCl（標準品）英文名稱： Vincristine Sulfate角蛋白18抗體包裝25g
Prednisolone acetate(標準品)英文名稱： Vincristine Sulfate轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白抗體包裝10g
Prednisolone（標準品）英文名稱： Pazopanib22號染色體開放閱讀框45抗體包裝50g
Prednisone Acetate（標準品）英文名稱： Felodipine22號染色體開放閱讀框32抗體包裝100g
Prednisone(標準品)英文名稱： FelodipineCD5L抗體包裝25g
Pregnenolone Acetate(標準品)英文名稱： 6-TG/ThioguanineCD6抗體包裝500g
