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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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矢車菊素-O-半乳糖苷含量測(cè)試盒?操作步驟
2022-1-18 閱讀(168)
矢車菊素-O-半乳糖苷含量測(cè)試盒操作步驟(僅供參考)：
1.配制65mM H2O2基液：本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過(guò) 氧化氫不是非常穩(wěn)定，使用前需自行測(cè)定過(guò)氧化氫的實(shí)際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍，使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。
2.準(zhǔn)備樣品：
a,細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解，可以采用Leagene Western及IP細(xì)胞裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，低速離心取上清，-70℃凍存，用于CAT的檢測(cè)。
b,血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，用生理鹽水10倍稀釋后， 可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，尿液通常也可以直接用于測(cè)定，-70℃凍存，用于CAT的檢測(cè)。
c,全血樣品：收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內(nèi)，顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次，用CAT Assay buffer1000倍后進(jìn)行CAT檢測(cè)。
d,血液中的紅細(xì)胞裂解液：用抗凝管收集血液，顛倒混勻。取至少500μl全血4℃3000g離心5min，棄上清，沉淀用預(yù)冷的生理鹽水洗滌3次。
e,高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的CAT，可以使用CAT Assay buffer稀釋。
f,(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù) 計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的CAT含量。
3、CAT檢測(cè)：按照下表設(shè)置空白管、自身對(duì)照管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并 注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。樣品的檢測(cè)能設(shè)置平行孔。
4、分光光度計(jì)檢測(cè)405nm處吸光度，分光光度計(jì)比色杯光徑0.5cm。如果沒(méi)有分光光度計(jì)，亦可用酶標(biāo)儀檢測(cè)，但如果有條件，盡量采用分光光度計(jì)檢測(cè)。蒸餾水調(diào)零，讀取各管吸光度值。一般應(yīng)數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢。
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