一、服務介紹
數(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術。相較于qPCR,數(shù)字PCR可直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),可以對起始樣品定量,是一種全新的核酸分子定量技術。

dPCR與qPCR方法相比,本方法無需核酸標準品,定量的結(jié)果不再依賴于 Ct 值;又兼具qPCR方法的優(yōu)點,且結(jié)果的精確度、準確性和靈敏度更佳。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域:拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達研究(如等位基因不平衡表達)、二代測序結(jié)果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等,在環(huán)境微生物和病原體基因的檢測、遺傳病、**、NGS數(shù)據(jù)驗證等方面將具有更廣闊的應用前景。
二、實驗原理
通過把稀釋到一定濃度的DNA分子分布在一定數(shù)目的微滴中,使大部分微滴中的DNA分子數(shù)目為1或0,然后通過PCR擴增和熒光信號的累計讀取陽性微滴數(shù)目,有熒光信號的微滴判讀為1;沒有熒光信號的微滴判讀為0,再根據(jù)泊松分布計算出樣本中的DNA分子數(shù)。
三、服務流程
1、樣品DNA(或RNA)提取及模板制備
2、引物探針設計合成
3、PCR擴增
4、檢測微滴
5、分析數(shù)據(jù)、顯示結(jié)果
四、客戶提供
樣本(DNA,RNA,血液,組織,石蠟切片等),樣本的物種信息,基因信息(NCBI登錄號);探針選擇Taqman還是MGB
血液樣品:樣品為EDTA抗凝或枸椽酸鈉抗凝,樣品量大于0.5 mL,樣品采集后于-20°C或-80°C保存,低溫(≤-4°C)運輸。
組織樣品:樣品可以為新鮮組織(-80°C保存)或石蠟包埋的組織,也可以是95%乙醇中固定的組織,組織量大于100 mg。組織樣品用干冰運輸。
DNA樣品:純度OD260/280 比值為 1.6-1.8,濃度≥10 ng/μL,體積≥20 μL。
RNA樣品:純度OD260/280 比值為 1.8-2.0,濃度≥20 ng/μL,體積≥20 μL。需要干冰運輸。
五、交付內(nèi)容
實驗報告:包括實驗方法、步驟、所用試劑、儀器、照片及相關分析數(shù)據(jù)等。
周期:1個月左右