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南京金益柏生物科技有限公司
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細胞凋亡是指為維持內環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統的
流 式 法
一、服務介紹
細胞凋亡是指為維持內環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統的發(fā)育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型，而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制。凋亡是多基因嚴格控制的過程。
二、實驗原理
Annexin V/PI雙染檢測細胞凋亡：在正常細胞中，磷脂酰*（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰*（PS）由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰*有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰*與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素標記，以標記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。
三、實驗流程
1.細胞培養(yǎng)，接種6孔板；
2.按的方式誘導細胞凋亡；
3.不含EDTA的*消化貼壁細胞并離心收集；
4.重懸細胞，加Annexin V/PI染色；
5.流式細胞儀檢測；
6.結果統計分析。
四、服務說明
1.客戶提供：培養(yǎng)好的細胞以及所需藥品
2.公司提供：基本實驗步驟、流式圖片、數據分析結果、剩余藥品。
3.實驗周期: 1-2周左右，具體需要根據細胞生長情況及實驗內容而定。
TUNEL法
二、實驗原理
TUNEL法（terminal dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling，末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP 缺口末端標記測定法），也稱DNA斷裂的原位末端標記法。細胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進的分階段的過程，染色體DNA首先在內源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300 kb的大片段，然后大約30%的染色體DNA在Ca2+和Mg2+依賴的核酸內切酶作用下，在核小體單位之間被隨機切斷，形成180～200 bp核小體DNA多聚體。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現缺口而產生的一系列DNA的3’-OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或*形成的衍生物標記到DNA的3’-末端，再用辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素與衍生物上*結合（每個鏈霉親和素至少可以再結合3個*分子），zui后用DAB、過氧化氫與辣根過氧化物酶發(fā)生氧化、環(huán)化反應，形成苯乙肼聚合物而呈現棕褐色，zui終通過計數每張切片上不同視野中TUNEL陽性細胞的比例來判斷細胞凋亡發(fā)生情況。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3’-OH形成，很少能夠被染色。
三、實驗流程
1.收集處理后的細胞或石蠟切片脫蠟至水。
2.過氧化氫甲醇中浸洗，抑制內源性過氧化氫酶。
3.用蛋白酶K室溫孵育15~30分鐘。
4.滴加TUNEL反應混合液（即配即用，4oC避光），孵育60分鐘，在熒光鏡下（綠色）分析結果。
5.加入轉化劑-POD，孵育20~30 min。
6.加入DAB底物溶液，孵育5~10 min。
8.中性樹膠或者甘油封片，光鏡下分析結果。
四、服務說明
1.客戶提供：培養(yǎng)好的細胞以及所需藥品；或者提供石蠟標本
2.公司提供：基本實驗步驟、圖片、數據分析結果、剩余藥品
3.實驗周期: 2-3周左右，具體需要根據細胞生長情況及實驗內容而定。
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