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南京金益柏生物科技有限公司
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更新時間:2016-11-03 17:09:09瀏覽次數(shù):577次
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南京金益柏wb細(xì)胞收集實驗方法,針對WB,南京金益柏特意詳細(xì)列出了具體實驗的方法以及步驟,下面就是實驗的過程:
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WB收集細(xì)胞:
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉,用PBS清洗兩次,使用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮,將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保留底層細(xì)胞。如要裂解細(xì)胞6孔板(99ulRIPA+1ulPMSF),細(xì)胞培養(yǎng)皿(198ulRIPA+2ulPMSF),若要做磷酸化蛋白則加如1ul抑制磷酸化蛋白降解抑制劑,加入細(xì)胞裂解液后用移液器將細(xì)胞吹勻,冰上靜置5min,離心4℃ 12500g/5min,吸取上清液,置于-80℃冰箱;若不裂解細(xì)胞,將細(xì)胞置于-80℃冰箱。
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普通PCR收集細(xì)胞:
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉,用PBS清洗兩次,使用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮,將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保留底層細(xì)胞。將細(xì)胞置于-20℃冰箱。
qRT-PCR收集細(xì)胞:
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉,用PBS清洗兩次,使用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮,將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保留底層細(xì)胞。加入1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。(注意:本實驗需使用耗材和試劑都為無RNA酶,PBS必須高壓,離心管和槍頭必須無酶)
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