細(xì)胞：HFLS-RA細(xì)胞
中文名稱(chēng)：人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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內(nèi)毒素所致SIRSMODS小鼠脾細(xì)胞損傷的形態(tài)學(xué)觀察
目的應(yīng)用大腸桿菌內(nèi)毒素脂多糖(LPS)腹腔注射制備小鼠全身炎癥反應(yīng)綜合征/多器官功能失常綜合征(SIRS/MODS)模型.
方法:
用免疫組化的方法檢測(cè)了Bcl-2的表達(dá).
結(jié)果隨LPS作用時(shí)間的延長(zhǎng),脾損傷逐漸加重.HE染色中,生發(fā)中心和動(dòng)脈周?chē)馨颓史謩e在LPS注射后9小時(shí)和18小時(shí)出現(xiàn)大量深淺不一的顆粒狀細(xì)胞碎片.
TUNEL陽(yáng)性染色細(xì)胞隨時(shí)間延長(zhǎng)而增多.電鏡下可見(jiàn)到凋亡的淋巴細(xì)胞.在18小時(shí)還見(jiàn)到細(xì)胞壞死現(xiàn)象.
Bcl-2的表達(dá)隨著LPS作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯下降,與TUNEL染色的相關(guān)分析表明,Bcl-2的表達(dá)與細(xì)胞凋亡有顯著的負(fù)相關(guān).
結(jié)論在LPS所致的SIRS/MODS模型中,脾細(xì)胞損傷以凋亡為主,隨LPS作用時(shí)間延長(zhǎng)而加重,在晚期還會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞壞死.Bcl-2參與了LPS引起的脾細(xì)胞凋亡效應(yīng).
