細(xì)胞：SK-N-BE(2)細(xì)胞
中文名稱：人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
生長特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；)
甲胎蛋白對HeLa細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用
為探討甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)對腫瘤細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用.
用從人臍帶血中提取的AFP作用于體外培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞, 通過MTT計(jì)數(shù)、 [3H]-TdR參入法、流式細(xì)胞儀等研究細(xì)胞增殖,
并用放射免疫法測定細(xì)胞內(nèi)cAMP、共聚焦顯微鏡掃描細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度等觀察細(xì)胞內(nèi)第二信使物質(zhì)的改變及測定32P轉(zhuǎn)移反映細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶A(PKA)活性；
用western 印跡分析法分析突變型p53、 p21ras蛋白表達(dá). 結(jié)果顯示AFP(濃度大于10 mg/L)對HeLa細(xì)胞增殖有明顯的促進(jìn)作用.
在AFP(20 mg/L)作用下, HeLa細(xì)胞cAMP濃度升高300%; Ca2+濃度最大升高154.9%、 PKA活性最大升高100%. 突變型p53和p21ras 分別增高81.1%(24 h)和96.2%(24 h).
抗甲胎蛋白單克隆抗體能有效地阻斷AFP促HeLa細(xì)胞增殖作用.
以上表明,
(1)AFP具促HeLa細(xì)胞增殖的生理功能；
(2)AFP促進(jìn)HeLa細(xì)胞增殖的作用是通過影響細(xì)胞內(nèi)cAMP和Ca2+濃度以及PKA活性進(jìn)而促進(jìn)一些原癌基因的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的.
