細(xì)胞:HLE細(xì)胞
中文名稱(chēng):人肝癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:MEM+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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加速哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因研究的新技術(shù)
雖然數(shù)十年的遺傳學(xué)研究已揭露了不少攸關(guān)構(gòu)成生物之細(xì)胞的信息。由于人類(lèi)及其它哺乳動(dòng)物細(xì)胞的技術(shù)限制,精密復(fù)雜的遺傳實(shí)驗(yàn)通常僅可能以諸如發(fā)面酵母菌、果蠅及線蟲(chóng)類(lèi)蠕蟲(chóng)等`樣板`生物進(jìn)行。
這些生物中的基本發(fā)現(xiàn),往后可能適用于人類(lèi)細(xì)胞,不過(guò)即使到那時(shí)候,過(guò)程也是艱辛費(fèi)力的。
研究人員正致力于改變上述態(tài)勢(shì)。攸關(guān)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中直接進(jìn)行遺傳分析的新技術(shù)報(bào)告。
該技術(shù)就諸多生物醫(yī)學(xué)的應(yīng)用而言,具有大大簡(jiǎn)化發(fā)現(xiàn)基因及操縱基因的潛力。該技術(shù)能節(jié)省每基因數(shù)個(gè)月的研究工作。
研究人員研發(fā)出一種令他們能于老鼠細(xì)胞中,以鎖定或任意目標(biāo)的方式,關(guān)閉任何基因(或基因組合體)的簡(jiǎn)便策略。以此關(guān)閉(或間接開(kāi)啟)基因的能耐,研究人員能達(dá)成若干事情。
細(xì)胞有何變化,他們能推斷特定基因的功能。此外藉由任意關(guān)閉基因,研究人員能選取那些展現(xiàn),諸如對(duì)癌腫治療具改善反應(yīng)等,引人矚目之新屬性的細(xì)胞。后者無(wú)成見(jiàn)的處理方式,是確認(rèn)供癌腫新療法或治療其它疾病作為潛在標(biāo)的基因,很誘人的方法。