細胞：VERO C1008(E6)細胞
中文名稱：非洲綠猴腎細胞
生長特性：貼壁細胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；)
揭開真核細胞分泌過程的秘密
在真核細胞中,分泌型的脂和蛋白質(zhì)從高爾基體反面的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)逐步移向質(zhì)膜,該過程受到了載體囊泡網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的嚴格控制。這種囊泡是如何形成的，現(xiàn)在還沒有清晰的答案。
蛋白激酶D和磷脂酰肌醇4-激酶IIIβ相互作用，并促進該過程的發(fā)生。
人體內(nèi)有三種蛋白激酶D同工型，PKD1-3。已經(jīng)知道的至少有兩個，PKD1和PKD2，在TGN膜形成載體囊泡中起重要作用；
具體過程仍然不知。磷酸化的膜成分PI(4)P也被認為調(diào)節(jié)著這個過程?？蒲腥藛T從而研究了在從TGN到質(zhì)膜的囊泡運輸中，PKD蛋白和PI4K之間的相互關(guān)聯(lián)情況。
在哺乳細胞中有很多的PI4K酶，PI4KIII是一種與酵母的PI4K酶--Pik1同源的蛋白激酶。Pik1在酵母的“高爾基體-細胞表面”運輸通路中起作用。
在哺乳細胞中也研究了這個蛋白質(zhì)。發(fā)現(xiàn)三種PKD同工型和PI4KIIIβ共定位于高爾基體復合物中；體外的實驗表明，PKD同工型可以促使PI4KIII磷酸化。
PKD1和PKD2可以識別PI4KIIIβ的磷酸化位點Ser294，該位點在酵母Pik1具有保守性。通過使用抗磷酸化位點的抗體，科研人員證實了PKD介導的PI4KIIIβ磷酸化過程在體內(nèi)也同樣發(fā)生。
