細(xì)胞：MDA-MB-468細(xì)胞
中文名稱：人乳腺腺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：L15+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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研究使用了膜支撐的芯片平臺(tái)。通過固定模式組裝金屬納米結(jié)構(gòu)，并置入二氧化硅基質(zhì)中，從而形成脂質(zhì)層，而膜芯片由這種脂質(zhì)層構(gòu)建而成。
這種金屬結(jié)構(gòu)允許胞膜蛋白以一定間距排列在膜上，從而可以在類似芯片平臺(tái)的膜上實(shí)時(shí)觀察某個(gè)蛋白。在此次研究過程中，這一獲得支撐的膜使得研究人員可以捕捉每個(gè)SOS分子，從而觀察其激活的膜相關(guān)Ras蛋白的活動(dòng)，從分子層面對(duì)膜環(huán)境的Ras活性進(jìn)行研究。
該研究證實(shí)SOS蛋白(Son of Sevenless)激活 Ras信號(hào)的機(jī)制?；罴?xì)胞中Ras的激活涉及一些SOS分子，從而使得每個(gè)分子的多樣化行為得到平均(average)。這一突變被認(rèn)為是一種隨機(jī)的“噪點(diǎn)”，研究人員多數(shù)認(rèn)為這是細(xì)胞必須克服的一個(gè)錯(cuò)誤。
此次研究顯示，該蛋白隨著活性傳輸信息而在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)換動(dòng)態(tài)，這意味著研究人員發(fā)現(xiàn)了蛋白信號(hào)反應(yīng)的動(dòng)態(tài)耦合完_全基于動(dòng)力學(xué)，而不是信號(hào)被平均(average)的結(jié)果。
該研究發(fā)現(xiàn)，SOS根據(jù)不同活性狀態(tài)，基于獨(dú)_特的隨機(jī)波動(dòng)動(dòng)力學(xué)來(lái)實(shí)現(xiàn)其調(diào)控作用，而這一現(xiàn)象在集成平均化(enseMBLe averages)的過程中是無(wú)法體現(xiàn)的。這一長(zhǎng)期波動(dòng)解釋了變構(gòu)SOS調(diào)控和Ras激活的機(jī)制。
揭示Ras蛋白信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制中的隨機(jī)動(dòng)力學(xué)變化有利于找到治療Ras導(dǎo)致的癌癥和其他細(xì)胞紊亂疾病的新型高效療法。實(shí)際上，研究人員認(rèn)為這一機(jī)制的揭示對(duì)于很多其他胞內(nèi)信號(hào)蛋白的機(jī)制的研究也具有啟發(fā)作用。
