細胞:MDA-MB-468細胞
中文名稱:人乳腺腺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:L15+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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研究使用了膜支撐的芯片平臺。通過固定模式組裝金屬納米結(jié)構(gòu),并置入二氧化硅基質(zhì)中,從而形成脂質(zhì)層,而膜芯片由這種脂質(zhì)層構(gòu)建而成。
這種金屬結(jié)構(gòu)允許胞膜蛋白以一定間距排列在膜上,從而可以在類似芯片平臺的膜上實時觀察某個蛋白。在此次研究過程中,這一獲得支撐的膜使得研究人員可以捕捉每個SOS分子,從而觀察其激活的膜相關(guān)Ras蛋白的活動,從分子層面對膜環(huán)境的Ras活性進行研究。
該研究證實SOS蛋白(Son of Sevenless)激活 Ras信號的機制?;罴毎蠷as的激活涉及一些SOS分子,從而使得每個分子的多樣化行為得到平均(average)。這一突變被認為是一種隨機的“噪點”,研究人員多數(shù)認為這是細胞必須克服的一個錯誤。
此次研究顯示,該蛋白隨著活性傳輸信息而在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)換動態(tài),這意味著研究人員發(fā)現(xiàn)了蛋白信號反應(yīng)的動態(tài)耦合完_全基于動力學(xué),而不是信號被平均(average)的結(jié)果。
該研究發(fā)現(xiàn),SOS根據(jù)不同活性狀態(tài),基于獨_特的隨機波動動力學(xué)來實現(xiàn)其調(diào)控作用,而這一現(xiàn)象在集成平均化(enseMBLe averages)的過程中是無法體現(xiàn)的。這一長期波動解釋了變構(gòu)SOS調(diào)控和Ras激活的機制。
揭示Ras蛋白信號傳導(dǎo)機制中的隨機動力學(xué)變化有利于找到治療Ras導(dǎo)致的癌癥和其他細胞紊亂疾病的新型高效療法。實際上,研究人員認為這一機制的揭示對于很多其他胞內(nèi)信號蛋白的機制的研究也具有啟發(fā)作用。