細(xì)胞：B16-F10細(xì)胞
中文名稱(chēng)：小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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干細(xì)胞維持多能性所必需的基因
基因通過(guò)打開(kāi)或關(guān)閉其它基因作為對(duì)胚胎中信號(hào)的應(yīng)答從而決定了干細(xì)胞的命運(yùn)。
Foxd3可以加入到早先識(shí)別出的胚胎發(fā)生的早期階段中胚胎控制干細(xì)胞多能性的基因大家族中，這個(gè)家族已包括Oct4、Fgf4和Sox2等成員。
這表明Foxd3的功能區(qū)或是在Oct4、Fgf4 和Sox2基因的下游，或是沿一條與它們平行的通路,通過(guò)補(bǔ)充進(jìn)非突變的胚胎干細(xì)胞到Foxd3突變的胚胎中，可以恢復(fù)胚胎的正常發(fā)育，這說(shuō)明Foxd3是在內(nèi)部細(xì)胞團(tuán)以及衍生細(xì)胞中活動(dòng)的。
Foxd3是哺乳動(dòng)物干細(xì)胞的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控基因，在人類(lèi)基因組中也存在對(duì)應(yīng)的版本。Foxd3基因表達(dá)是人類(lèi)胚胎干細(xì)胞的一個(gè)診斷特征，這表明這個(gè)基因在小鼠和人類(lèi)細(xì)胞中可能是以相似的方式執(zhí)行功能的。
如果利用干細(xì)胞作為臨床治療的手段，那么識(shí)別出控制干細(xì)胞分化過(guò)程的關(guān)鍵調(diào)控基因如Foxd3等絕對(duì)是至為重要的。
一旦了解這這些基因是如何執(zhí)行功能的，距離塑造干細(xì)胞為滿(mǎn)足我們需要的形式就為時(shí)不遠(yuǎn)了。
