細胞:RINm5f細胞
中文名稱:大鼠胰島β細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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在人多種胚胎組織如胰腺、骨髓、肝臟、皮膚、骨骼肌和肺等中分離出具有多系分化潛能的原始干細胞,在適當條件下可向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞、內皮細胞、肝臟樣上皮細胞、神經細胞及造血細胞分化;
將其輸入接受超致死劑量射線照射的受體小鼠,可重建受體小鼠的造血功能;并可在小腸、肝、肺、皮膚及造血等多種組織中分化和再生;
分離獲得的Flk1+CD31-CD34-細胞具有高度的分化潛能,在體內不僅參與造血重建及微血管損傷的修復,而且還能分化為氣管、肺、消化道上皮細胞以及肝細胞等。
將新鮮人臍帶血中分離和純化的Lin-CD34+CD38-造血干/祖細胞通過宮內注射移植到胎山羊體內,成功建立了山羊/人干細胞嵌合體,為評估人造血干細胞長期移植存活、擴增和分化提供了一種大動物模型,也為組織損傷的修復、異種移植、免疫耐受性和產前治療的研究等提供了技術平臺。
應用逆轉錄病毒載體MSCV-BCR-ABL-IRES-GFP轉染Lin-CD34+CD38-造血干/祖細胞,通過宮內注射到胎齡為45-55天的胎山羊腹腔內,使含有BCR/ABL基因的人造血干/祖細胞長期植活于山羊的不同組織中,建立了CML的大動物模型,為分析人類CML和其他疾病的發(fā)病機制及治療提供了良好的研究手段。
研究表明,來自多種組織的ASC移植可治療多種疾病。然而,人們對ASC分子生物學特性了解尚少,阻礙了ASC的體外培養(yǎng)和體內組織再生研究和應用。