細胞:NRK-52E細胞
中文名稱:大鼠腎小管上皮細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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干細胞培育環(huán)境影響干細胞分化
在紫外光照射下,這種凝膠會軟化,這使得研究能夠改變底物的硬度,且無需分離及轉(zhuǎn)移細胞至新環(huán)境。發(fā)現(xiàn)細胞在硬底物上培養(yǎng)一天然后恢復(fù)至軟表面培養(yǎng)后,RUNX2會“失活”從細胞核重定位到細胞質(zhì)。
(人MDA-MB-435S細胞 來源:通派細胞庫 人乳癌細胞)
然而如果細胞在硬底物上培養(yǎng)10天再轉(zhuǎn)換為軟底物,之后的10天時間里RUNX2仍在細胞核中活化。當檢測YAP激活時看到了相似的結(jié)果。在硬底物上度過的時間越長,細胞于軟表面培養(yǎng)時YAP活化的時間也相應(yīng)延長。
(人M14細胞 來源:通派細胞庫 人黑色素瘤細胞)
研究結(jié)果還具有實用意義。如果一種體外培養(yǎng)過程能夠無意中誘導(dǎo)細胞某方面活化……它們有可能不會像研究人員所猜測的那樣運轉(zhuǎn)。這無疑增加了我們關(guān)于體外應(yīng)該如何培養(yǎng)干細胞的認識。
(人M4A4細胞 來源:通派細胞庫 人乳癌細胞)
RUNX2、YAP以及其他的一些改變與細胞在硬材料上度過的時間相關(guān),但這樣的關(guān)聯(lián)未必確定證實了這些改變的原因。