EGY48 Chemically Competent Cell

酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

溫馨提示

見我司（懋康生物）整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品標(biāo)簽

LexA雙雜交系統(tǒng)；EGY48；Y2HGold；pGBKT7；pLexA；Aureobasidin A （AbA）；金擔(dān)子素；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品包裝

產(chǎn)品描述

酵母雙雜交系統(tǒng)是用于體內(nèi)研究蛋白相互作用的一種非常便利的工具，目前采用的有LexA系統(tǒng)和GAL4系統(tǒng)。在LexA系統(tǒng)中，DNA結(jié)合域（DNA- BD）由一個(gè)完整的原核蛋白LexA構(gòu)成，轉(zhuǎn)錄激活域（AD）由一個(gè)大腸桿菌來源的含88個(gè)氨基酸殘基的酸性肽B42構(gòu)成），在酵母中能活化基因的轉(zhuǎn)錄。正常情況，BD和AD不會(huì)結(jié)合，將待檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成誘餌融合蛋白（bait-DNA）和誘捕融合蛋白（prey-DNA），只有當(dāng)誘餌和誘捕蛋白發(fā)生相互作用，促使BD和AD的相互接近，才能激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。

EGY48是LexA系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株，MATα型，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或雙雜交文庫篩選和構(gòu)建。轉(zhuǎn)化標(biāo)記為ura3，his3，trp1。報(bào)告基因?yàn)?/span>LEU2。EGY48-LexA酵母雙雜交系統(tǒng)需要三種質(zhì)粒配套使用，分別為pLexA、pB42AD和p8op-LacZ。質(zhì)粒pLexA的篩選標(biāo)志為HIS3，用于表達(dá)誘餌融合蛋白。pB42AD的篩選標(biāo)志為TRP1，用于表達(dá)誘捕融合蛋白。報(bào)告質(zhì)粒p8op-LacZ的篩選標(biāo)志為URA3，報(bào)告基因?yàn)?/span>LacZ，報(bào)告基因UAS來源于LexA op (x6)，只有當(dāng)誘餌（Bait）和誘捕（Prey）相互作用才能啟動(dòng)LacZ表達(dá)。

本品為經(jīng)特殊工藝制備的EGY48酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，用pGBKT7質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個(gè)月。

基因型

MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的EGY48化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重復(fù)一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
2. 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
3. 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH₂O重懸沉淀，離心30s棄上清。
4. 用50 µl ddH₂O重懸，涂板，放入29℃培養(yǎng)48-96 h。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

EGY48酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

EGY48酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞