增強(qiáng)型BCA蛋白定量試劑盒 濃縮型配方，能檢測更低濃度的蛋白
PD-BCA-E 面議污水處理設(shè)備 污泥處理設(shè)備 水處理過濾器 軟化水設(shè)備/除鹽設(shè)備 純凈水設(shè)備 消毒設(shè)備|加藥設(shè)備 供水/儲(chǔ)水/集水/排水/輔助 水處理膜 過濾器濾芯 水處理濾料 水處理劑 水處理填料 其它水處理設(shè)備
上海炎熙生物科技有限公司
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| 參 考 價(jià) | 面議 |
產(chǎn)品型號PD-BCA-500
品 牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
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更新時(shí)間：2017-03-16 22:32:19瀏覽次數(shù)：496次
聯(lián)系我時(shí)，請告知來自 環(huán)保在線BCA蛋白定量試劑盒是一種基于二喹啉甲酸比色法的總蛋白檢測和定量試劑盒，比Lowry法更為*，以快速靈敏、穩(wěn)定可靠且對不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)甚小而深受專業(yè)人士的青睞，樣品中離子型和非離子型去污劑對其影響較小，檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)。
BCA蛋白定量試劑盒 快速靈敏、穩(wěn)定可靠
BCA蛋白定量試劑盒
Bicinchoninic Acid Kit for Protein Determination
貨號 | 組份A | 組份B | BSA標(biāo)準(zhǔn)品 |
|
PD-BCA-500 | 500 ml | 12 ml | 2 X 1 ml | 可供250個(gè)試管，或25塊96孔板測試用 |
BSA標(biāo)準(zhǔn)品為5 mg/ml BSA，溶于水中，含0.05%疊氮鈉。
室溫運(yùn)輸和儲(chǔ)存。如因溫度低或長時(shí)間放置出現(xiàn)沉淀，將其搖勻即可使用。BSA標(biāo)準(zhǔn)品保存在-20度，如出現(xiàn)微生物污染則應(yīng)丟棄。
產(chǎn)品簡介
BCA蛋白定量試劑盒是一種基于二喹啉甲酸比色法的總蛋白檢測和定量試劑盒，比Lowry法更為*。BCA蛋白定量法以快速靈敏、穩(wěn)定可靠且對不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)甚小而深受專業(yè)人士的青睞，樣品中離子型和非離子型去污劑對其影響較小，檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)。BCA法的原理：在堿性環(huán)境下，蛋白質(zhì)將銅離子還原成亞銅離子，二喹啉甲酸（BCA）與亞銅離子形成紫色的絡(luò)合物，這種絡(luò)合物溶于水并在562 nm處產(chǎn)生光吸收峰值，光吸收強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量呈近似線性關(guān)系，因此使用比色法可以對蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測和定量。BCA法沒有反應(yīng)終點(diǎn)，反應(yīng)會(huì)隨著時(shí)間而持續(xù)進(jìn)行；通過一段時(shí)間的孵育后，反應(yīng)速度會(huì)變慢，從而可以對大量樣品進(jìn)行檢測。
在蛋白質(zhì)的大分子結(jié)構(gòu)中，與BCA反應(yīng)顏色形成相關(guān)的是肽鍵和四種氨基酸（半*，*，*，以及*）。對二肽、三肽和四肽的研究表明，反應(yīng)顏色的形成不僅僅是單個(gè)的功能基團(tuán)效果疊加的結(jié)果。因此，蛋白濃度通常是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)對照蛋白（常用牛血清白蛋白BSA）推測而來的，即：將標(biāo)準(zhǔn)對照蛋白的光吸收值做一個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知樣品的光吸收值參照曲線方程計(jì)算出蛋白濃度值。
標(biāo)準(zhǔn)蛋白和工作液的配制
B. BCA工作液的配制
1. 根據(jù)需要測定的未知樣品和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量以及復(fù)孔數(shù)來計(jì)算所需的BCA工作液體積。如使用試管進(jìn)行測試，每管需2.0 ml工作液, 而使用96孔板進(jìn)行測試則每孔需200 µl 工作液。
2. 按 組份A:組份B=50:1 的比例配制BCA工作液。組份B加入組份A的時(shí)候，開始會(huì)出現(xiàn)渾濁并隨著混勻很快消失，zui終混勻后溶液呈蘋果綠色。配置好的工作液在室溫密閉的條件下24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
操作步驟
1. 如在試管中進(jìn)行反應(yīng)，取100 μl的BSA蛋白梯度或者待測樣品，放入標(biāo)記好的試管中，再每管加入2.0 ml工作液，充分混勻， 蓋上蓋子，并在選定的溫度條件下孵育：
· 室溫: 室溫孵育 2 hours (檢測范圍： 20-2000 μg/ml)
· 37度: 37°C 孵育30 minutes (檢測范圍： 20-2000 μg/ml)
· 60度： 60°C 孵育30 minutes (檢測范圍： 5-250 μg/ml)
延長孵育時(shí)間會(huì)增加光吸收值；應(yīng)使用水浴法加熱，以使得溫度均衡上升；用鼓風(fēng)法升溫會(huì)導(dǎo)致溫度不均衡，使實(shí)驗(yàn)誤差增大。
2. 如需在96孔板中進(jìn)行反應(yīng)，則每孔放入10 μl的BSA蛋白梯度或者待測樣品，再加入200 μl工作液，充分混勻，37度孵育30分鐘，檢測范圍為125-2000 μg/ml；也可以將BSA蛋白梯度和待測樣品提高到每孔25 μl，再加入200 μl工作液，充分混勻，37度孵育30分鐘，此時(shí)檢測范圍為20-2000 μg/ml，但是可能會(huì)較多受到樣品中的干擾物質(zhì)的干擾；應(yīng)使用水浴法加熱。
3. 將試管或96孔板冷卻至室溫。
4. 用分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀在562 nm處讀取光吸收值, 所有樣品應(yīng)在10分鐘內(nèi)讀完。因?yàn)?/span>BCA反應(yīng)沒有終點(diǎn)，隨著時(shí)間的推移光吸收值會(huì)繼續(xù)上升，在10分鐘內(nèi)讀完所有樣品可以避免產(chǎn)生明顯的誤差。
5. 將BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品的光吸收值減去空白對照值，以得到的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品光吸收值對蛋白濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)這個(gè)曲線方程計(jì)算待測樣品的蛋白濃度。
注意事項(xiàng)：
· 測定蛋白濃度時(shí)，使未知樣品的蛋白濃度處于標(biāo)準(zhǔn)擬合曲線的接近中間位置，這樣獲得的結(jié)果更準(zhǔn)確。
· 通過增加孵育時(shí)間或者提高樣品比例，可以提高光吸收值，從而檢測更低的蛋白量，但是會(huì)縮小檢測范圍，可根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行調(diào)整，同時(shí)注意不要超過儀器的檢測上限。
· zui適檢測波長為562 nm。在540 nm到590 nm區(qū)間也可進(jìn)行檢測, 但標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率和檢測靈敏度都會(huì)有所降低。
· 酶標(biāo)儀的檢測光徑比分光光度計(jì)的比色杯短，因而檢測靈敏度有所降低。
· 對酶標(biāo)儀的讀數(shù)進(jìn)行曲線擬合時(shí)， 采用four-parameter (quadratic) 或 best-fit curve 進(jìn)行擬合可以獲得比線性擬合更準(zhǔn)確的結(jié)果；手工擬合時(shí)可采用線性擬合法。
· EDTA濃度必須小于10 mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時(shí)，請使用Bradford蛋白濃度測定法。
· 每種常用的總蛋白測定方法測定不同的蛋白時(shí)都有一些偏差。導(dǎo)致產(chǎn)生這些偏差的原因有：蛋白質(zhì)的氨基酸序列，等電點(diǎn)，蛋白的結(jié)構(gòu)，特定種類的氨基酸側(cè)鏈和輔基。有些種類的氨基酸側(cè)鏈和輔基能對顯色反應(yīng)產(chǎn)生很大的影響。大部分蛋白測定方法都使用牛血清白蛋白（BSA）或免疫球蛋白(IgG)作為標(biāo)準(zhǔn)品來制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果需要特別精確的檢測結(jié)果，可以使用待測蛋白的純品來制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
· 一些物質(zhì)可以干擾BCA反應(yīng)，如還原劑、絡(luò)合劑，以及強(qiáng)酸和強(qiáng)堿。還有一些物質(zhì)干擾較小，只要不超過zui大兼容濃度即不影響反應(yīng)的進(jìn)行。詳見http://www.biothrive。。ｃｎ/Product/016975434.html
· 本產(chǎn)品*于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
· 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
常見問題
問題 | 可能原因 | 解決辦法 |
沒有顏色 | 樣品中含有銅離子絡(luò)合劑 | 1，透析，脫鹽，或稀釋樣品； 或2，提高工作液中銅離子的濃度，如提高A:B至50:2； 或3，使用蛋白沉淀法去除干擾物 |
空白對照孔光吸收值正常，但是蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品光吸收值低于預(yù)期 | 樣品所用溶劑是強(qiáng)酸堿性緩沖液，改變了工作液的pH值 | 透析，脫鹽，或稀釋樣品 |
光吸收波長選擇錯(cuò)誤 | 在562 nm讀取光吸收值。 | |
待測樣品孔光吸收值高于預(yù)期 | 蛋白濃度過高 | 稀釋樣品 |
樣品中含有脂類或脂蛋白 | 向樣品中加入2% SDS以除去脂類干擾 | |
使用蛋白沉淀法去除干擾物 | ||
所有孔，包括空白對照孔，呈暗紫色 | 緩沖液中含有還原劑 | 1,透析或稀釋樣品; 或2，使用蛋白沉淀法去除干擾物 |
緩沖液中含有硫醇 | ||
緩沖液中含有生物胺(兒茶酚胺) | ||
需要用不同的波長讀取光吸收值 | 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)沒有562 nm濾光片 | 可以讀取540 nm到590 nm區(qū)間的光吸收值, 但是標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和檢測靈敏度都會(huì)降低。 |
BCA蛋白定量試劑盒 快速靈敏、穩(wěn)定可靠
BCA蛋白定量試劑盒 快速靈敏、穩(wěn)定可靠
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