細(xì)胞糖原硫酸蒽酮比色法定量檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途
細(xì)胞糖原硫酸蒽酮比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)乙醇去脂、酸化水解等處理后，水解產(chǎn)生葡萄糖單
體，與硫酸蒽酮反應(yīng)，生成藍(lán)綠色產(chǎn)物，即采用比色法測(cè)算糖原含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)
過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種細(xì)胞（動(dòng)物、人體、植物等）裂解懸液樣品糖原含量的檢測(cè)。
產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，檢測(cè)敏感。
技術(shù)背景
糖原（glycogen）是以α-1,4主鏈，α-1,6旁鏈形式的葡萄糖多聚體。作為動(dòng)物體內(nèi)主要的短期能量?jī)?chǔ)備分
子，糖原由肝臟和肌肉生成，并存在于皮膚、肝臟、甲狀旁腺（parathyroid gland）、骨骼肌和心肌中。異常
利用糖原常見(jiàn)于糖尿病和遺傳性糖原存儲(chǔ)疾?。?genetic glycogen storage disease ） 等?；谳焱?br />（9,10-Dihydro-9-oxoan-thracene；Anthranone）可以與游離的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸發(fā)
生反應(yīng)的原理，糖原分子受到酸性水解后，產(chǎn)生葡萄糖，與硫酸蒽酮反應(yīng)，生成藍(lán)綠色產(chǎn)物，在分光光度
儀（620nm 波長(zhǎng)）下出現(xiàn)吸光峰值的變化，來(lái)定量測(cè)定樣品中糖原的含量。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） ml
堿性液（Reagent B） ml
水解液（Reagent C） ml
萃取液（Reagent D） ml
凈化液（Reagent E） ml
酸性液（Reagent F） ml
染色液（Reagent G） ml
標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H） μl
說(shuō)明書(shū)1 份
保存方式
保存在4℃冰箱里；試劑具有腐蝕性，注意操作安全； 染色液（Reagent G）避免光照；有效保證6 月
用戶自備
1.5 毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制和反應(yīng)的容器
2 毫升離心管：用于樣品操作的容器
15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
細(xì)胞刮脫棒：用于貼壁細(xì)胞脫離
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品制備
干式恒溫儀或恒溫水槽：用于反應(yīng)孵育
比色皿：用于比色的容器
2
分光光度儀：用于比色分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、樣品準(zhǔn)備
1． 準(zhǔn)備好25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm 細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞（1X 106 細(xì)胞）
2． 小心加入xx 毫升清理液（Reagent A），覆蓋生長(zhǎng)表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞（注意：可以使用胰酶消化）
5． 加入xx 毫升清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞
6． 移入到預(yù)冷的15 毫升錐形離心管（注意：懸浮細(xì)胞從這一步驟開(kāi)始）
7． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5 分鐘，速度為300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入xx 微升堿性液（Reagent B）
10．渦旋震蕩15 秒
11．轉(zhuǎn)移到2 毫升離心管
12．放進(jìn)100℃干式恒溫儀孵育10 分鐘
13．放進(jìn)冰槽里孵育5 分鐘
14．加入xx 微升預(yù)冷的水解液（Reagent C）
15．渦旋震蕩15 秒
16．加入xx 毫升萃取液（Reagent D）
17．置于冰槽里孵育30 分鐘
18．放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10 分鐘，速度為3000g（或5500RPM，例如eppendorf 5415）
19．小心抽去上清液
20．加入xx 毫升凈化液（Reagent E）
21．渦旋震蕩15 秒
22．放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10 分鐘，速度為3000g（或5500RPM，例如eppendorf 5415）
23．小心抽去上清液
24．加入xx 微升酸性液（Reagent F）
25．渦旋震蕩15 秒
26．放進(jìn)100℃干式恒溫儀孵育10 分鐘
27．放進(jìn)冰槽里孵育5 分鐘
28．即刻置于冰槽里備用
二、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制
1． 準(zhǔn)備好5 個(gè)1.5 毫升離心管，標(biāo)記為1 至5 號(hào)管
2． 分別加入xx 微升清理液（Reagent A）到每個(gè)離心管
3． 移取xx 微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H）到1 號(hào)管，混勻
4． 小心移取xx 微升1 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H）到2 號(hào)管，混勻
5． 小心移取xx 微升2 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H）到3 號(hào)管，混勻
6． 小心移取200 微升3 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H）到4 號(hào)管，混勻
7． 將1 至5 號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表
3
管號(hào)標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H） 清理液（Reagent A） 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度
1 xx 微升xx 微升xx 微克/毫升
2 xx 微升1 號(hào)管xx 微升xx 微克/毫升
3 xx 微升2 號(hào)管xx 微升xx 微克/毫升
4 xx 微升3 號(hào)管xx 微升xx 微克/毫升
5 —— xx 微升0
三、樣品測(cè)定
1． 設(shè)定好分光光度儀：波長(zhǎng)620nm，并置零
2． 分別移取xx 微升染色液（Reagent G）到1.5 毫升離心管
3． 分別加入200 微升上述制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品或待測(cè)樣品
4． 上下傾倒混勻
5． 煮沸10 分鐘
6． 室溫下冷卻10 分鐘，避免光照
7． 轉(zhuǎn)移到新的比色皿
8． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)（620nm 波長(zhǎng)）：獲得吸光讀數(shù)
9． 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y 軸）為吸光讀數(shù)；橫座標(biāo)（X 軸）為標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度（微克/毫升）
10．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)葡萄糖濃度（微克/毫升）
11．計(jì)算樣品實(shí)際葡萄糖濃度（微克/毫升）
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為25 次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)液
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
4． 孵育時(shí)，避免光照
5． 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品用量；注意在計(jì)算實(shí)際濃度時(shí)，不要忘記調(diào)整計(jì)算公式
6． 糖原濃度表述方式：
7． 本公司提供系列醫(yī)學(xué)生化檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感